Панчишин актер: Звезды — Страница 122 | новости, фото и видео на сайте Без Табу

Разное

Содержание

Звезды — Страница 122 | новости, фото и видео на сайте Без Табу

Обсуждает вся сеть: Маколей Калкин впервые за долгое время вышел в свет

38-летний американский актер и музыкант Маколей Калкин, который прославился еще в детстве благодаря глваной роли в фильме «Один дома», удивил всех своим появлением на светском мероприятии.

10.10.2018, 21:50

Не постил фото в Instagram: Сергея Шнурова избил подписчик

Популярного российского исполнителя, солиста музыкальной группы «Ленинград» Сергея Шнурова побили. Последствия драки, о которой он расскзал в своем микроблоге, остались у певца на лице.

10.

10.2018, 21:30

Дихай повільно: Сергей Бабкин презентовал трек из нового альбома

39-летний украинский музыкант Сергей Бабкин выпустил новую композицию «Дихай повільно», которая вошла в его новый украиноязычный альбом «Музасфера».

10.10.2018, 19:50

Шкідлива звичка: Христина Соловий в новой песне спела о лучшем друге

25-летняя украинская исполнительница Христина Соловий презентовала новую композицию «Шкідлива звичка», которая стала заключительной в предстоящем третьем альбоме певицы.

10.10.2018, 19:30

В образе сексуальной фантазии: Даша Астафьева представила клип на песню Fetish

Чулки, кожаное боди, плетки, корсет, шибари и многое другое ждет зрителя в новом клипе Даши Астафьевой на песню «Fetish».

10.10.2018, 17:45

Пока Кайли Дженнер нарушает обещания – Ким Кардашьян показывает грудь

37-летняя звезда скандального реалити «Семья Кардашьян» пришла на презентацию новой коллекции ювелирного бренда Tiffany «Blue Book Collection» в Нью-Йорке без лифчика и засветила грудь.

10.10.2018, 17:15

Вышел трейлер к фильму «Лучший день в моей жизни»: актеры, сюжет, премьера

На официальном Youtube-канале компании Paramount опубликовали первый официальный трейлер романтической драмы «Лучший день в моей жизни». Мировая премьера запланирована на 9 ноября этого года.

10.10.2018, 16:40

TAYANNA похвасталась сексуальным телом в новом клипе

Украинская певица Татьяна Решетняк, известная под псевдонимом TAYANNA, не прекращает радовать поклонников откровенными видеоработами к своим песням.

10.10.2018, 15:55

Победитель 8 сезона шоу «Х-фактор» Миша Панчишин выпустил первый клип

Победитель восьмого сезона вокального шоу «Х-фактор» Миша Панчишин презентовал свой первый клип на авторскую песню «Вода ледяная», которую написал после расставания с девушкой.

10. 10.2018, 15:25

Селена Гомес продала роскошный особняк по дешевке и снялась в клипе скандальной певицы

Американская певица, актриса и посол доброй воли ЮНИСЕФ Селена Гомес переживала в 2018 году не лучшие времена. Проблемы со здоровьем, расставание с Джастином Бибером, а потом новость о его помолвке – не лучшим образом повлияли на психологическое состояние артистки.

10.10.2018, 14:25

Мои дочери думают, что я астронавт: Райан Гослинг скрывает от детей правду

Совсем скоро на экраны выйдет биографическая драма «Человек на Луне» с голливудским актером Райаном Гослингом в главной роли. Знаменитость настолько вжился в роль, что его маленькие дочки теперь убеждены, что их папа — астронавт.

10.10.2018, 11:50

Ненавидящий украинский язык Кошевой обозвал Баскова и российских звезд (ВИДЕО)

Евгений Кошевой пояснил отказ «95 квартала» от сотрудничества с российскими звездами тем, что у них в голове «немного нас**но».

10.10.2018, 11:40

Адель заработала 12 миллионов долларов ничего не делая

30-летняя британская исполнительница Адель на некоторое время взяла перерыв в кареьере. Знаменитость не выпускала новых композиций или клипов, не давала концерты, но все равно смогла заработать немалую сумму.

10.10.2018, 11:30

Руби Роуз в образе Бэтвумен — первое фото

В сети появилась первая фотография, на которой 32-летняя австралийская модель, телеведущая, диджей, певица и актриса Руби Роуз предстала в супергеройском костюме.

10.10.2018, 10:50

Евгений Кошевой признался, когда «Квартал 95» перестанет высмеивать политиков

Украинский юморист, участник студии «Квартал 95» Евгений Кошевой рассказал о том, почему их команда всегда шутит над политиками и когда перестанет это делать. Больше того, Кошевой отметил, что и сам был бы рад перестать высмеивать слуг народа.

10.10.2018, 10:30

Фантастические твари: на новом постере показали всех героев ленты

В сети появился новый постер предстоящего фантастического фильма «Фантастические звери: Преступления Гриндевальда», мировая премьера которого намечена на 16 ноября 2018 года.

10.10.2018, 09:50

Энрике Иглесиас откровенно рассказал об интимной жизни с возлюбленной

43-летний испанский исполнитель Энрике Иглесиас уже на протяжении долгого времени встречается с экс-теннисисткой Анной Курниковой. У пары уже даже есть дети, а вот свою личную жизнь знаменитости все равно пытаются держать в секрете.

10.10.2018, 09:30

В приоритете семья: Бен Аффлек расстался с возлюбленной-моделью Playboy

46-летний американский актер, сценарист, кинорежиссер и продюсер Бен Аффлек совсем недавно официально развелся со своей супругой Дженнифер Гарнер. Однако, как уверяют инсайдеры, у актера все равно в приоритете его семья.

10.10.2018, 08:50

Омск – город будущего!. Официальный портал Администрации города Омска

Омск — город будущего!

Город Омск основан в 1716 году. Официально получил статус города в 1782 году. С 1934 года — административный центр Омской области.

Площадь Омска — 566,9 кв. км. Территория города разделена на пять административных округов: Центральный, Советский, Кировский, Ленинский, Октябрьский. Протяженность города Омска вдоль реки Иртыш — около 40 км.

Расстояние от Омска до Москвы — 2 555 км.

Координаты города Омска: 55.00˚ северной широты, 73.24˚ восточной долготы.

Климат Омска — резко континентальный. Зима суровая, продолжительная, с устойчивым снежным покровом. Лето теплое, чаще жаркое. Для весны и осени характерны резкие колебания температуры. Средняя температура самого теплого месяца (июля): +18˚С. Средняя температура самого холодного месяца (января): –19˚С.

Часовой пояс: GMT +6.

Численность населения на 1 января 2020 года составляет 1 154 500 человек.

Плотность населения — 2 036,7 человек на 1 кв. км.

Омск — один из крупнейших городов Западно-Сибирского региона России. Омская область соседствует на западе и севере с Тюменской областью, на востоке – с Томской и Новосибирской областями, на юге и юго-западе — с Республикой Казахстан.

©Фото Б.В. Метцгера

Герб города Омска

Омск — крупный транспортный узел, в котором пересекаются воздушный, речной, железнодорожный, автомобильный и трубопроводный транспортные пути. Расположение на пересечении Транссибирской железнодорожной магистрали с крупной водной артерией (рекой Иртыш), наличие аэропорта обеспечивают динамичное и разностороннее развитие города.

©Фото Алёны Гробовой

Город на слиянии двух рек

В настоящее время Омск — крупнейший промышленный, научный и культурный центр Западной Сибири, обладающий высоким социальным, научным, производственным потенциалом.

©Фото Б.В. Метцгера

Тарские ворота

Сложившаяся структура экономики города определяет Омск как крупный центр обрабатывающей промышленности, основу которой составляют предприятия топливно-энергетических отраслей, химической и нефтехимической промышленности, машиностроения, пищевой промышленности.

©Фото Б.В. Метцгера

Омский нефтезавод

В Омске широко представлены финансовые институты, действуют филиалы всех крупнейших российских банков, а также брокерские, лизинговые и факторинговые компании.

Омск имеет устойчивый имидж инвестиционно привлекательного города. Организации города Омска осуществляют внешнеторговые отношения более чем с 60 странами мира. Наиболее активными торговыми партнерами являются Испания, Казахстан, Нидерланды, Финляндия, Украина, Беларусь.

Город постепенно обретает черты крупного регионального и международного делового центра с крепкими традициями гостеприимства и развитой инфраструктурой обслуживания туризма. Год от года город принимает все больше гостей, растет число как туристических, так и деловых визитов, что в свою очередь стимулирует развитие гостиничного бизнеса.

©Фото Б.В. Метцгера

Серафимо-Алексеевская часовня

Омск — крупный научный и образовательный центр. Выполнением научных разработок и исследований занимаются более 40 организаций, Омский научный центр СО РАН. Высшую школу представляют более 20 вузов, которые славятся высоким уровнем подготовки специалистов самых различных сфер деятельности. Омская высшая школа традиционно считается одной из лучших в России, потому сюда едут учиться со всех концов России, а также из других стран.

©Фото А.Ю. Кудрявцева

Ученица гимназии № 75

Высок культурный потенциал Омска. У омичей и гостей нашего города всегда есть возможность вести насыщенную культурную жизнь, оставаясь в курсе современных тенденций и течений в музыке, искусстве, литературе, моде. Этому способствуют городские библиотеки, музеи, театры, филармония, досуговые центры.

©Фото В.И. Сафонова

Омский государственный академический театр драмы

Насыщена и спортивная жизнь города. Ежегодно в Омске проходит Сибирский международный марафон, комплексная городская спартакиада. Во всем мире известны такие омские спортсмены, как борец Александр Пушница, пловец Роман Слуднов, боксер Алексей Тищенко, гимнастка Ирина Чащина, стрелок Дмитрий Лыкин.

©Фото из архива управления информационной политики Администрации города Омска

Навстречу победе!

Богатые исторические корни, многообразные архитектурные, ремесленные, культурные традиции, широкие возможности для плодотворной деятельности и разнообразного отдыха, атмосфера доброжелательности и гостеприимства, которую создают сами горожане, позволяют говорить о том, что Омск — город открытых возможностей, в котором комфортно жить и работать.

©Фото из архива пресс-службы Ленинского округа

Омск — город будущего!

#джейсон момоа Tumblr posts — Tumbral.com

История моего знакомства с «Дюной» довольно короткая. Прослушав восхитительную аудиокнигу по «Властелину колец», я решила прослушать еще одну книгу с этим же чтецом. Книгой оказалась «Дюна», в ней ощутимо был виден предшественник «Звездных войн», в чем-то более оригинальный, в чем-то – такой же скучный по части политики, в которой я не могла разобраться. Прослушала чуть больше половины и отложила, решив, что сначала фильм, а потом посмотрим. После фильма хочется дочитать, хотя я помню, насколько сложно продраться сквозь стиль автора. После фильма хочется быстрее пересмотреть снова, разглядеть новые детали, взглянуть на сюжет уже с полным пониманием, кто есть кто. Причем в кино смотреть не хочется, там многое отвлекает, а вот домашняя камерность, на мой взгляд, подойдет фильму как нельзя лучше, ведь он совсем не блокбастер, он такой… авторский? Здесь совершенно нестандартный для кассового кино темп – неспешное погружение в мир, знакомство с его устройством, привыкание к героям.
Здесь очень деликатно и сдержанно показаны эмоции, почти нет юмора, все серьезно, но не так чтобы пафосно. Очень много пространства в кадре, что словно бы добавляет напряжения действию и одиночества героям. Лаконичная цветовая гамма, похожий на лабиринт монтаж кадров. И, конечно, здесь потрясающий саундтрек, который периодически сливается с фоном фильма и наполняет его. Все это – кадр, музыка, сдержанность, масштабность, неспешность, даже медитативность, виртуозный монтаж, минималистичный и напряженный саундтрек – черты авторского стиля Дэни Вильнева, знаю и люблю его «Прибытие», но не ожидала, что и в «Дюне» он окажется настолько верен себе. В фильм довольно долго втягиваешься, но когда это случается, понимаешь, зачем так было сделано – чтобы все было понятно и чтобы можно было сопереживать. Причем мне понравилось, что меня не разводили на эмоции, и весь фильм не покидало ощущение осознанности просмотра и продуманности каждого шага. В целом чувство, что я посмотрела что-то большее, чем массовое кино. Другой масштаб и другая глубина, безумно красиво, но не укачивает, не ослепляет и не бьет по ушам. Такой личный, последовательный рассказ о взрослении мальчика, которому суждено стать избранным, и он осознанно принимает это путь. Из актеров отмечу, конечно, Тимоти Шаламе, потому что он лучший мальчик, его Пол очень многогранный, понятный, меняющийся к финалу. В нем столько всего! Он и хрупкий, и умелый, и немного надменный (сын герцога, в конце концов), и по-мальчишески искренний. Очень хороший Пол, очень красивый, подумалось, что в нем есть что-то от Фродо и Энакина, что, родись Тимми раньше, он бы их отлично сыграл. В книге моим любимым персонажем был Дункан Айдахо, местный Хан Соло, обаятельный и находчивый. Он добавлял книге жизни и теплоты. В фильме его было как будто меньше, возможно, из-за того, что фильм – это история Пола. Но все равно он классный, теплый, очень родной, и Джейсон Момоа удивительно хорошо ему подошел. Из других персонажей отмечу Лето. Какой-то холодный и неживой в книге, в фильме он предстал любящим отцом, и его смерть была грустной, но такой красивой. Джессику я ожидала увидеть более красивой и властной, а она оказалась какой-то нервной и хрупкой, так, что иногда казалось, будто Пол ее старше. Но это даже хорошо, потому что даже в книге их отношения не очень напоминали сына и мать, и мне от них было еще более неуютно, чем в фильме. Доктор Юэ, Гёрни, Чани, Барон Харконнен, Лиет Кайнс – тоже яркие и запоминающиеся образы, очень полные в своем воплощении. Хотя куда более впечатляющая здесь пустыня, песчаные черви, природа Арракиса – и это, я думаю, правильно, ведь для фантастики важен завораживающий и объемный мир, который нам так постарались показать во всей красе. Именно мир объясняет характеры людей, в нем живущих, в том числе и Пола, и мне пока не хватает воображения представить, каким он может стать после жизни в пустыне. Кем-то очень сильным и умелым? Но сохранит ли он свою чистоту? Пока же я очень рада тому, что это его история. Что он растет, меняется, неуловимо, но заметно становится более зрелым. Очень рада, что его играет Тимми, потому что он отлично умеет играть такое, из глубины, взросление, потому что в нем самом много глубинного нерва и огня. А еще его Пол кажется очень добрым и чистым, такое мимолетное «Аввв» и восхищение, то, что нужно для главного героя Отличный фильм, в общем. В конце даже показалось, что мне мало, вот бы он шел еще пару часов! Было очень насыщенно, умело и красиво. Было хорошо.

Записи эфиров BamBarBia.TV. Самые интересные видео на тему путешествий! | Сеть агентств горящих путевок

30 июня

Бамбарбия — живой турофис. 30.06.2016. Туры в Турцию и ситуация в Стамбуле
ТЕЗ ТУР: Тур БАЛТИЙСКИЙ КРУИЗ. Отдых в Эстонии и Латвии и экскурсии в страны Северной Европы. Гость студии — Юрий Панчишин.

29 июня

Кто кому Рабинович на туристическом рынке? Гости студии: Светлана Шатилина – директор ТО Делфа-Тур и Нина Козенко — директор «Компанія БЛАКИТНА ХВИЛЯ».
Живой турофис Бамбарбия.

24 июня

Ночной эфир BAMBARBIA.TV 24.06.2016: Аукцион туров, Охота на Бамбардир и беседы о театре. Гости студии – актеры Алексей Тритенко, Вера и Александр Кобзарь, а также представители компании Альф Туристический Оператор.

23 июня

10-00 Особенности гастрономических туров. Главная гостья студии – гастрономический эксперт и ресторатор Виктория Пархоменко. О странах, о впечатлениях, о важных нюансах!
11-00 Бамбарбия — Живой турофис. ONLINE!
12-05 TPG: ЮАР и Маврикий. Гость студии: Анна Зборанская — руководитель департамента экзотики.

22 июня

10-00 Свадебные и романтические путешествия и медовый месяц. Гости студии: Мария (Дуэт «Анна-Мария») и ее супруг — Вадим.
11-00 Лето в странах Балтии – кому и зачем? Узнайте, как туда добраться, что посмотреть и какой тур выбрать! На ваши вопросы о странах Балтии ответит специалист по туризму в Северной Европе — Светлана Шатилина, директор ТО Делфа-Тур.
12-00 Как самостоятельно подавать документы на шенген визу. Виноват ли консул в отказе? Как избежать самых распространённых ошибок при оформлении визы в Европу? Гость студии: Александра Алтуфьева — директор AB SMART TRAVEL.
12-30 Вся правда о бизнесе в Польше! Гость студии: Александра Алтуфьева — директор AB Smart travel.

21 июня

10:00 Живой турофис.
11-00 Альф Туристический Оператор: Албания + Аукцион туров.
12-30 Автотуризм: путешествия на автомобиле по Северной Европе. Гости студии — фотогораф Валентин Карминский и директор ТО Делфа-Тур Светлана Шатилина.

17 июня

Ночной эфир BamBarBia.TV 17.06.2016

15 июня

Скайдайвер Дмитрий Беляк — на BamBarBia.TV
Греческий круиз — эксклюзив от TEZ TOUR
Чехія: Прага та лікувальні курорти. Цікаві подорожі — Веди Тургрупп Украина

14 июня

10:00 Гость студии — украинская певица, актриса и телеведущая – Лавика! Говорим обо всем понемногу и, конечно же, о любимых странах и запомнившихся путешествиях!
11:00 «Бамбарбия — живой турофис» LIVE!

13 июня

10:00 Гость студии — Роман Медный — известный стилист и визажист. Чаще всего закупает вещи в Милане, на втором месте — Испания. 15 июня летит в Нью-Йорк. Тема беседы: «Путешествия и шопинг».
11:00 «Бамбарбия — живой турофис» LIVE!

9 июня

10.00 Утро на BAMBARBIA.TV. Гость студии: певица Наталка Карпа.
11.05 Делфа-ТУР СНОВА В ЭФИРЕ! Специальный гость эфира — Володимир Нечипорук, генеральный продюсер Ukrainian Fashion Week.
12.15 TPG: Черногория. Аукцион туров!

8 июня

10:00 Утро на  BAMBARBIA.TV.  Гость студии Алекс Комаровский — актер, продюсер, режиссер, в прошлом – профессиональный спортсмен. Тема беседы: «Как отдыхают мужчины?». Мы постараемся выяснить, в чем преимущества отдыха без женщин, как и где предпочитают отдыхать мужчины и какие путешествия больше всего запомнились.
11:00 Супер-цены на туры от компании АЛЬФ Туристический Оператор + Аукцион путевок в Черногорию!

7 июня

10:00 Утро на BamBarBia. TV. В гостях у студии: Ксения Тейлор — психолог, психотерапевт и коуч. Тема беседы: «Как правильно подготовиться к поездке и преодолеть стресс во время путешествий?»

6 июня

10:00 «Молодым везде у нас дорога!» В гостях у студии — украинский актер и телеведущий Вячеслав Соломка.
11:00 ТК Центр: Тур в Хорватию «Далматинское очарование».

3 июня

10:00 Беседа с менеджером проекта 1DEA.me Евгением Пономаренко. Что подарить заядлому путешественнику? Как работает карта желаний? Что такое мотивационные постеры и скретч-карты мира? Как возникла идея создания дизайнерских подарков 1DEA.me?
11:00 TPG: Испания. Юлия Мыць — менеджер отдела бронирования.
11:35 TPG: Греция. Римма Клопова — менеджер отдела бронирования.
12:10 Tez Tour: Отдых с детьми на Кипре. Владимир Джердж — руководитель по развитию направлений Кипр и ОАЭ.
13:20 Tez Tour: Греция, Крит.  Юрий Панчишин — руководитель по развитию направления Греция.
15:00 Zabugor.com: Поездка в ОАЭ с детьми.
15:20 Zabugor.com: Отдых с детьми Бали.
16:00 Zabugor.com: Сейшелы. 

00:00 Ночной эфир BamBarBia.TV на 5 канале. 03.06.2016. Покорившая Эверест!

2 июня

10:00 Утро на BamBarBia.TV. В гостях у студии — группа Open Kids. Open Kids — это больше, чем просто поп-группа. Open Kids — это пять талантливых, добрых и прекрасных молодых исполнительниц: Ангелина, Аня, Лера, Юля и Аня — которые поют, танцуют и творят, потому что они искренне любят вдохновлять окружающих людей. Open Kids — это яркие звезды, которые загорелись среди талантливых детей Украины, которые светят и зажигают все новые огни среди своих друзей, поклонников и слушателей.

11:00 Отдых на Мальте. Юлия Мыць — менеджер отдела бронирования.
11:35 Словакия. Детские лагеря.  Мелиш Эрминэ — ведущий менеджер направления и Райчук Валентина — специалист отдела продаж.
12:10 Хорватия. Семейный отдых. Жарая Мария — ведущий менеджер направления и Демиденко Татьяна — специалист отдела продаж.
12:45 Грузия. Демиденко Татьяна — ведущий менеджер направления и Жарая Мария — специалист отдела продаж.

1 июня

10:00 Утро на BamBarBia.TV. В гостях у студии – сам доктор Комаровский! Тема беседы: «Подготовка ребенка к поездке в лагерь или за границу».
11:00 TPG: Болгария. Юнна Коваленко — руководитель отдела бронирования.
11:35 TPG: Кипр. Александр Туник — руководитель отдела бронирования.
12:10 Идриска Тур: Испания.  Артур Любич и Ирина Соловицкая.
12:45 Альф Туристический Оператор: Черногория. Райчук Валентина — ведущий менеджер направления, Ольга Костыря — специалист отдела продаж.
13:20 Альф Туристический Оператор: Албания.
14:00 Альф Туристический Оператор: Болгария. Шевчук Елена — ведущий менеджер направления, Ищенко Олег — специалист отдела продаж.

Х-фактор-9: кто ушел в выпуске 16 от 15.12.2018

Сегодня, 15 декабря, зрители телеканала СТБ увидели четвертый прямой эфир «Х-фактор»-9! Чем запомнился вечер Х и кто покинул шоу – узнайте в нашем материале.

Больше по теме: Билеты на прямые эфиры «Х-фактор» не продаются: как попасть на шоу?

Четвертый прямой эфир «Х-фактор»-9 был посвящен танцевальным хитам. Участникам пришлось выкладываться на этом эфире в 2 раза больше, ведь они исполнят по 2 песни, одну из которых для них выбрал наставник-конкурент.

Так, DukeTime исполнили «Цвет настроения синий» по заданию от Андрея Данилко. Композиция очень нехарактерная для группы, так что готовились ребята усердно. Но для них нет невыполнимых задач — справились блестяще!  

Дмитрию Волканову достался хит судьи проекта Олега Винника «Біла голубка». Юному романтику пришлось нелегко при подготовке. Молодой человек достойно выступил перед автором и исполнителем песни.

Рок-дива Ольга Жмурина смогла показать себя на полную. Ей достались мировые хиты: No Doubt «Don’t Speak» и Tito & Tarantula «After Dark».

Марк Савин зарядил своей энергетикой весь зал! Искреннее и чувственное исполнение песни Николая Носкова «Я тебя люблю» не оставило никого равнодушным. А «Квіти в Волоссі» группы Бумбокс даже заставили плакать зрителей в зале.

Неожиданным и заключительным стало выступление ZBSband. Ребятам удалось дважды удивить зрителей. В первый раз авторской песней «Будь, що буде», и во второй раз переделав на свой манер Carrapicho «Tic tic tac».

Звездным гостем четвертого эфира стал победитель «Х-фактор» 8 сезон — Миша Панчишин! Артист порадовал поклонников своего творчества представив новую песню «Baby». После его выступления, участники приготовились к самому долгожданному моменту эфира – оглашению результатов. Андрей Бедняков получил конверт с итогами зрительского голосования и объявил имена тех, кто попал в номинацию. Ими стали Ольга Жмурина, DukeTime и Петя Гарасимов.

После борьбы за жизнь проект навсегда покинули DukeTime и Петя Гарасимов.

Больше по теме: «Х-фактор»-9 меняет правила выбывания в прямых эфирах и сокращает перерыв 

Как прошел четвертый прямой эфир «Х-фактор»-9, смотрите прямо сейчас!

Video: Кто покинул «Х-фактор»-9 на четвертом прямом эфире?

Читайте, кто ушел из проекта Х-фактор-9 в выпуске 16 от 15.12.2018. Кто из участников покинул проект и больше не сможет продолжать борьбу за победу? Читайте в нашем материале

Читайте больше интересных новостей в Viber и Telegram СТБ

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

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

PCEtLSAvNTgzMDI4NDQvU0xEU19TVEJfY29udGVudF9iYW5uZXIgLS0+DQo8ZGl2IGlkPSdkaXYtZ3B0LWFkLTE0ODI0ODU5ODcxNzQtMCcgc3R5bGU9J21hcmdpbjogMCBhdXRvO2hlaWdodDo0MDBweDsgd2lkdGg6NTgwcHg7Jz4NCjxzY3JpcHQ+DQpnb29nbGV0YWcuY21kLnB1c2goZnVuY3Rpb24oKSB7IGdvb2dsZXRhZy5kaXNwbGF5KCdkaXYtZ3B0LWFkLTE0ODI0ODU5ODcxNzQtMCcpOyB9KTsNCjwvc2NyaXB0Pg0KPC9kaXY+

Все отзывы о фильме Астерикс и Обеликс в Британии

Все, за что мы любили «Астерикса и Обеликса», казалось бы, осталось и в четвертой части… Но что-то незаметно ушло, что-то, что цепляло внимание, делало героев близкими и любимыми. Смешными, забавными, такими родными.

Вся серия состояла из фильмов о современности в историческом антураже. Присутствовали в картинах исторические атрибуты широкими мазками, чтобы было явно видно, о каком примерно времени фильм, но все, все, что делали герои, над чем потешались, что чувствовали – все это было актуально, современно, даже порой остро. Однако эта – четвертая – часть, такой современностью уже похвастаться не может. Т.е. и в ней есть явные отсылки к современности, но какие-то мало вразумительные. Они смотрятся не как интересные находки, не как сатира, а как вынужденные реверансы в пользу выбранного стиля. Получилась не современная сказка о некоем времени, а вполне себе история с юмором о прошлом, зачастую оторванном от настоящего. Пропала острота, пропал эффект узнавания знакомых лиц/явлений/событий. История, которая раньше на этом в основном и строилась, мило так перешла в ряд банальных картин, «Астерикса» теперь спасают только греющие душу воспоминания о любимом прошлом.

История, которая рассказывается в данной картине, кажется в чем-то даже мелковатой… Фильмы серии всегда радовали именно размахом истории, когда, глядя на экран, мы видели масштабную сюжетную линию, когда сатира и смех были уместны. Много улыбок вызывала именно масштабность истории, некий контраст между изображенными здесь личностями людей, которые творили историю, часто многим смутно что-то напоминающую, и тем, к чему все привыкли. Нет, известные личности есть и здесь, но история как бы спустилась до более низкого уровня, до уровня отдельно взятой деревни. И это приближение на пользу фильму не пошло. Что-то где-то могло случиться. Но нет этого эффекта понимания, что происходит, о чем речь идет. Историю рассказывают зрителю с чистого листа, посмеяться можно разве что над традиционно карикатурными персонажами.

Наиболее интересным из которых является, безусловно, перевоспитавшийся викинг. Вот где есть некоторая издевка, усмешка над всеми этими традиционными методами воспитания, да и над таким понятием, как традиции, в целом. Традиции здесь рассматриваются не как что-то передающееся от поколения к поколению, светлое и свято чтимое, а как некий свод правил, запретов, предрассудков. Того, чего, увы, хватает в любом обществе, в данном случае, рассмотрено это на примере общества английского. Однако вся эта история с викингом может рассматриваться даже с позитивной точки зрения как положительный пример вливания приезжего в культурную среду. Если так дальше рассуждать, то вывод будет и вовсе не очень приятным…

Главные герои здесь все такие же яркие, разве что часть их лихости отобрали, что на пользу не пошло. В фильме меньше действия, смены декораций, чем в его предшественниках. Тут все больше каких-то ссор, объяснений, но юмора этим многочисленным диалогам не хватает. Т.е. часть из них смешная действительно, но часть – не особо, быстро надоедает, и это в плюс фильму явно не идет. Сама история кажется какой-то бесцельной – доставить груз из точки А в точку Б, но это даже уже не смешно. Интересных параллельных линий тоже не много, а те, что есть, зачастую вызывают жалость, а не улыбку.

Фильм можно посмотреть, он не затянут, но очарования в нем уже гораздо меньше, чем в предшественниках. Юмор, в целом, весьма неплох, но он лишен остроты, а сам фильм теперь кажется просто красивой игрушкой, а не интересной пародией-сатирой на многие явления и события. Теперь фильм сам по себе, современность сама по себе. Не хочется этого признавать, но картина потихоньку становится просто традиционным угощением, теряющим свою привлекательность и не умеющим адаптироваться под требования современности.

Одноразовая посуда в ресторанах и постепенное открытие границ. Как выходят из карантина Италия, Испания и Австралия

Страны и бизнес постепенно возвращаются к нормальной жизни.

Май 2020 — время возрождения бизнеса после темных недель карантина. Итальянцы еще в марте сидели по домам. Сейчас страна уже на втором этапе снятия ограничительных мер. Бары и рестораны приоткрыли двери. Столики пока расставлены на расстоянии полутора метров. Места нужно обязательно резервировать заранее. Открылись непродовольственные магазины. Свободно передвигаться пока разрешено только внутри региона. Но скоро обещают снять и это ограничение. Подробнее – в репортаже корреспондента телеканала «Санкт-Петербург».

«С 3 июня будет разрешен переезд между регионами. Скорее всего, регионы Пьемонт и Ломбардия откроются на две недели позже. Также с 3 июня Италия открывает свои границы на въезд для стран Евросоюза, стран Шенгенской зоны и Швейцарии. Это значит, что будет отменен двухнедельный карантин по приезду в страну».

Испания разделилась на две зоны. В первой – Барселона, Мадрид и Валенсия. Там ограничения жестче. Ресторанам разрешили открыть только на террасы. Занята треть столиков, больше пока нельзя. Работают мелкие магазинчики. 

В остальных городах рестораны пускают внутрь, открылись театры и кинозалы. Выехать за пределы региона или страны без уважительной причины невозможно. Границу откроют не раньше июля. Большинство испанских бизнесменов напрямую зависят от туристического потока. Многим пришлось закрыться.    

«К сожалению, кафе, рестораны открылись не все. Даже среди моих клиентов из 20, например, точек кафе, ресторанов, которые у них были, открылись только 7. Поэтому многие закрываются, кто-то обанкротились, у кого не было финансовой подушки безопасности, или у кого не было возможности кредитования в банке».

Австралия от коронавируса пострадала значительно меньше Европы. К ослаблению режима приступили еще в апреле. Но свободно передвигаться между штатами австралийцам все еще нельзя. Не могут они вылететь и за пределы материка. Зато работают почти все магазины. 

Рестораны открыты, но находиться в них одновременно могут не больше 10 человек. Правда, карантинные ограничения отбивают аппетит.

«Собирают на входе все данные, то есть ты пишешь свой адрес, телефон, прежде чем сесть. Посуда вся одноразовая, никто не выдает нормальные чашки, ничего. Тут же рядом стоят пустые столы и стулья на столах. Такое ощущение, что ты находишься в полузакрытом помещении и персонал на тебя смотрит, мол, лучше бы тебя здесь не было. В общем, мы решили не ходить, пока нормально все не откроют».

Страны и бизнес постепенно возвращаются к нормальной жизни. Всемирная организация здравоохранения не исключает, что позже может начаться вторая волна заболеваний. Тогда бизнес снова придется ставить на паузу. Но даже если этого не произойдет, вернуться на докризисный уровень мировая экономика сможет не раньше, чем через 2 года, считают эксперты.

Подписывайтесь на нас:

Фото: pixabay.com

Видео: телеканал «Санкт-Петербург»


 

Письмо Питерборо: объявление чрезвычайной климатической ситуации – хороший первый шаг экспертиза.

Сила свидетельства молодежи была неотразимой, будь то сотни людей, собравшихся в течение нескольких месяцев напротив мэрии, или в ООН и по всему миру.

В национальном масштабе канадское движение «Зеленый новый курс» стремится к 2050 году покончить с зависимостью от всех ископаемых видов топлива, одновременно решая насущные социальные проблемы, такие как расовое неравенство и неравенство в доходах.Переход на экологически чистую энергию требует элемента социальной справедливости, поскольку многие люди сталкиваются с потерей работы, экологическим расизмом, экстремальными погодными условиями, растущим разрывом между богатыми и бедными дома.

Кроме того, переход на возобновляемые источники энергии может затронуть людей в странах, где плохо регулируемая корпоративная деятельность уже наносит ущерб. Солнечные батареи, ветряные турбины, электромобили требуют драгоценных металлов, добываемых на глобальном юге, часто без защиты окружающей среды и прав человека. Для одной ветряной турбины требуется две тонны редкоземельных минералов, на солнечные панели в настоящее время приходится семь процентов мирового спроса на серебро.Кобальт для аккумуляторов электромобилей производится в основном в ДРК (Демократическая Республика Конго), печально известной детским трудом.

Канадские компании доминируют в горнодобывающей промышленности во всем мире, но не имеют принудительных регулирующих мер для них, действующих за рубежом. О нарушениях сообщалось на Филиппинах, в ДРК, Колумбии, Гватемале, Эквадоре и Мексике. В начале 2018 года канадское правительство должно было создать должность канадского омбудсмена по вопросам ответственного предпринимательства CORE. Невероятно, но эта должность была заполнена, но она бессильна, поскольку у нее нет ни независимости, ни полномочий для расследования.

Итак, наши мысли о решениях не должны затрагивать тех, кто уже борется. Проблема Первого мира должна решаться посредством раскаяния Первого мира и решений, основанных, например, на меньших потребностях, а не просто перенося воздействие на глобальный юг, когда мы находим наши удобные решения.

Марджи Сумад, Дублин Стрит

ПЕРВАЯ СЕКЦИЯ. ДЕЛО ПАНЧИШИН против РОССИИ. (Заявка № /05) СУДЕБНОЕ РЕШЕНИЕ СТРАСБУРГ. 27 ноября Скачать PDF бесплатно

1 ДЕЛО ПЕРВОЙ СЕКЦИИ ПО ДЕЛУ ПАНЧИШИНА против г. РОССИЯ (Заявление № /05) РЕШЕНИЕ, СТРАСБУРГ, 27 ноября 2014 г. Это решение является окончательным, но может быть подвергнуто редакционной правке.

2

3 ПАНЧИШИН против РОССИИ ПОСТАНОВЛЕНИЕ 1 По делу Панчишин против России Европейский суд по правам человека (Первая секция) заседал в составе: Ханлара Гаджиева, председателя, Жюлии Лаффранк, Дмитрия Дедова, судьи, и Сёрен Пребенсен, исполняющий обязанности заместителя Секретаря секции, проведя закрытое совещание 4 ноября 2014 года, выносит следующее решение, которое было принято в этот день: ПРОЦЕДУРА 1.Дело было возбуждено жалобой (№ /05) против Российской Федерации, поданной в Суд в соответствии со статьей 34 Конвенции о защите прав человека и основных свобод (Конвенция) гражданином России Панчишиным Андреем Игоревичем (заявитель ), 3 ноября Правительство Российской Федерации ( Правительство ) представлял Г. Матюшкин, Уполномоченный Российской Федерации при Европейском суде по правам человека. 3. 14 декабря 2011 г. председатель Первой секции принял решение уведомить Правительство о жалобе. Также было решено одновременно вынести решение о приемлемости и существу жалобы (статья 29 1). В соответствии с пилотным решением по делу Бурдов против России (№ 2) (№ /04, ЕСПЧ, 2009 г.) рассмотрение дела было отложено до разрешения на национальном уровне. 4. Правительство отказалось урегулировать дело, утверждая, что заявитель утратил статус потерпевшего. Поэтому Суд решил возобновить рассмотрение настоящего дела. ФАКТЫ I. ОБСТОЯТЕЛЬСТВА ДЕЛА 5. Заявитель родился в 1957 году и проживает в Пскове.6. С 5 января 2000 г. по 22 марта 2001 г. заявитель работал в Псковском отделении Федерального долгового центра. 22 марта 2001 г. долговой центр уволил его в связи с его ликвидацией, не выплатив ему определенные суммы компенсации. В разные даты национальные суды удовлетворили требования заявителя и присудили ему компенсацию задолженности по заработной плате, суммы индексации, моральный вред и почтовые расходы.Сведения о соответствующих решениях можно резюмировать следующим образом: Национальный суд Дата вынесения окончательного решения о присужденной сумме, российский мировой судья, окружной суд №. 28 Псковского мирового судьи, Судебный округ № 28. 28 г. Пскова Псковский городской суд, Псковская область Псковский городской суд, Псковские рубли (RUB) 27 июня июль, сентябрь сентябрь октябрь, сентябрь, май май, область 7. Заявитель представил исполнительные листы в отношении вышеуказанных постановлений в Министерство юстиции. Финансы в суде. Заявки были возвращены ему в сентябре. Заявитель обратился в суд за разъяснениями относительно исполнения четырех судебных решений, но его требования были отклонены.Он повторно подавал исковые заявления в Министерство финансов в декабре 2006 г. и сентябре 2009 г., и они были возвращены ему без исполнения в июне 2007 г. и декабре 2009 г. соответственно. 8. В 2010 г. заявительница потребовала компенсацию за длительное неисполнение приговора от 27 июня 2003 г. в соответствии с Федеральным законом №. № 68-ФЗ «О компенсации за нарушение права на судебное разбирательство в разумный срок или права на приведение в исполнение судебного решения в разумный срок» (Закон о компенсации, см. пункт 12 ниже).10 декабря 2010 г. Псковский областной суд удовлетворил его иск и присудил заявителю 30 000 рублей (примерно 730 евро) за неисполнение решения и 200 рублей в качестве компенсации судебных издержек. Эти суммы были ему полностью выплачены 16 марта. Решение от 27 июня 2003 г. осталось неисполненным. 9. В феврале 2012 г. заявитель снова направил исполнительные листы в Министерство финансов. Последний возбудил судебное дело о разъяснении и изменении решений в части, касающейся способа исполнения и исправления расчетных ошибок.Отдельными определениями Псковского городского суда и мирового судьи судебного округа от 29 марта 2012 г. 28 г. Пскова внесены изменения в первоначальные решения, как заявлено. 10. 18 апреля 2012 г. четыре первоначальных судебных решения в пользу заявителя были исполнены в полном объеме.

5 ПАНИШИН против РОССИИ ПОСТАНОВЛЕНИЕ 3 II. СООТВЕТСТВУЮЩЕЕ НАЦИОНАЛЬНОЕ ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВО A. Закон об исполнительном производстве 11. Относительно соответствующих положений об исполнительном производстве, действовавших в рассматриваемое время, см. Burdov (no.2), упомянутое выше, B. Новое внутреннее средство правовой защиты 12. 30 апреля 2010 г. российский парламент принял Закон о компенсации, который вступил в силу 4 мая. ), №№ /09 и 60650/09, 29-30, 23 сентября ЗАКОН I. ПРЕДПОЛАГАЕМОЕ НАРУШЕНИЕ СТАТЬИ 6 КОНВЕНЦИИ И СТАТЬИ 1 ПРОТОКОЛА № 1 В СВЯЗИ С НЕИСПОЛНЕНИЕМ 13. Заявитель жаловался на неисполнение -приведение в исполнение четырех судебных решений в его пользу, перечисленных в пункте 6 выше.Он сослался на статью 6 Конвенции и статью 1 Протокола № 1, которые в соответствующей части предусматривают следующее: Статья 6 1. При определении своих гражданских прав и обязанностей… каждый имеет право на справедливое… слушание… судом… Статья 1 Протокола № 1 Каждое физическое или юридическое лицо имеет право на беспрепятственное пользование своим имуществом. Никто не может быть лишен своего имущества, кроме как в общественных интересах и при соблюдении условий, предусмотренных законом и общими принципами международного права.Предыдущие положения, однако, никоим образом не нарушают права Государства применять такие законы, которые оно считает необходимыми для контроля за использованием собственности в соответствии с общими интересами или для обеспечения уплаты налогов или других взносов или штрафов. A. Приемлемость 14. Правительство утверждало, что заявитель утратил статус потерпевшего в результате решения, вынесенного 10 декабря 2010 г. Псковским областным судом в пользу заявителя (см. пункт 8). над).По мнению властей Российской Федерации, решение признало нарушение прав заявителя и предоставило ему адекватную компенсацию. Они просили суд признать жалобу неприемлемой. 15. Заявитель утверждал, во-первых, что 10 декабря 2010 г. ему была присуждена компенсация за неисполнение только одного из четырех судебных решений в его пользу. Во-вторых, он указал, что четыре решения в любом случае оставались неисполненными в течение значительного периода времени даже после выплаты компенсации, присужденной в соответствии с Законом о компенсации.Наконец, он утверждал, что компенсация не была адекватной и достаточной. 16. Суд повторяет, что для того, чтобы заявитель мог утверждать, что он является жертвой нарушения по смыслу статьи 34 Конвенции, он не только должен иметь статус потерпевшего на момент подачи жалобы, но и такой статус должен сохраняться на всех стадиях разбирательства. Решение или мера, благоприятствующая заявителю, в принципе недостаточны для лишения его статуса жертвы, за исключением случаев, когда национальные власти прямо или по существу признали нарушение Конвенции, а затем предоставили компенсацию (см. Amuur v. .France, 25 June 1996, 36, Reports of Judgments and Decisions 1996-III, and Dalban v. Romania [GC], no /95, 44, ECHR 1999-VI). 17. Прежде всего Суд отмечает, что, как правильно указал заявитель, решение от 27 декабря 2010 г. представляло собой компенсацию за неисполнение только одного из четырех национальных судебных решений, а именно решения от 27 июня. отмечает, что заявитель воспользовался процедурой, предусмотренной Законом о компенсации. В ряде более ранних дел Суд пришел к выводу, что Закон о компенсации способен решить проблему длительного неисполнения национальных судебных решений, если были соблюдены следующие условия: национальные суды должным образом рассмотрели дела в соответствии с критериями Конвенции, нарушение права на исполнение судебного решения в разумный срок и присудил компенсацию, сравнимую с решениями Суда по статье 41 по аналогичным делам, которая, в свою очередь, была быстро выплачена заявителям, как того требует Конвенция (см. Zabotin v. .Россия (реш.), № /09, 19, 13 марта 2012 г., Халин против России (реш.), № /05, 2 декабря 2010 г.; см. также, mutatis mutandis, Балагуров против России (реш.), №. 9610/05, 2 декабря 2010 г.). 18. Настоящее дело отличается двумя аспектами. Во-первых, сторонами не оспаривается тот факт, что первоначальное судебное решение в пользу заявителя от 27 июня 2003 г. оставалось неисполненным до апреля 2012 г., то есть более года после выплаты ему компенсации за неисполнение. Соответственно, денежная компенсация в его деле ни в коем случае не обеспечила надлежащего возмещения, учитывая упорное несоблюдение властями-ответчиком

7 ПАНЧИШИН против.РОССИЯ ПОСТАНОВЛЕНИЕ 5 исполнить первоначальное решение в течение более чем одного года после выплаты компенсации за неисполнение (см., с соответствующими изменениями, Наговицын и Нальгиев (реш.), упомянутое выше, 35). 19. Во-вторых, в любом случае достаточность денежной суммы, установленной национальным судом в качестве компенсации, вызывает сомнения: присужденная сумма составляет менее половины суммы, присужденной Судом по аналогичным делам, связанным с сопоставимыми задержками в исполнении (см. например, Азарьев против России, № /05, 28, 14 ноября 2008 г.).20. Соответственно, Суд заключает, что заявителю не было предоставлено адекватное и достаточное возмещение в связи с неисполнением решения от 27 июня 2003 г., и, таким образом, он все еще может считаться потерпевшим в соответствии со статьей 34 Конвенции. Суд считает, что разбирательство в соответствии с Законом о компенсации, возбужденное заявителем в связи с задержкой исполнения вышеупомянутого внутригосударственного судебного решения, оказалось неспособным решить вопрос о длительном неисполнении внутригосударственного судебного решения в конкретных обстоятельствах заявителя. случай.21. Таким образом, возражение властей Российской Федерации в отношении решения от 27 июня 2003 г. должно быть отклонено. 22. Далее Суд отмечает, что Правительство не выдвинуло каких-либо конкретных доводов в отношении предполагаемой утраты статуса потерпевшего и не выдвинуло никаких других возражений относительно неисполнения трех оставшихся судебных решений в пользу заявителя. 23. Соответственно, Суд отмечает, что эта жалоба на неисполнение четырех национальных судебных решений, упомянутых в пункте 6 выше, не является явно необоснованной по смыслу статьи 35 3 (а) Конвенции и что она не является недопустимым по каким-либо иным основаниям.Следовательно, оно должно быть признано допустимым. B. Существо дела 24. Правительство утверждало, что судебные решения были исполнены в сроки, установленные национальным законодательством. А именно, в последний раз судебные решения были получены для исполнения 24 февраля 2012 г. и должны были быть исполнены не позднее 24 мая. Правительство также заявило, что исполнительные документы о взыскании судебной задолженности были получены Министерством Министерства финансов несколько раз до 24 февраля 2012 года и возвращались без оплаты, что соответствовало положениям национального законодательства.Для того, чтобы приступить к исполнению судебных решений после их получения Министерством финансов 24 февраля 2012 года, последнее было вынуждено добиваться в судах разъяснений по четырем судебным решениям, изменения порядка и способа исполнения, а также корректировки расчетов. ошибки. 25. Заявитель утверждал, что четыре решения суда оставались неисполненными в течение более восьми лет. Он также заявил, что Министерство по делу

8 6 ПАНЧИШИН против.РОССИЙСКОЕ ПОСТАНОВЛЕНИЕ Финансы вернули ему исполнительные листы на формальных основаниях и на том, что Министерство не предприняло никаких действий для выполнения четырех имеющих обязательную силу судебных решений. Его попытки получить разъяснения относительно исполнения четырех судебных решений не увенчались успехом, поскольку его требования были отклонены национальными судами. 1. Общие принципы 26. Суд повторяет, что неоправданно длительная задержка исполнения вступившего в законную силу судебного решения может привести к нарушению Конвенции (см. Бурдов против России, № /00, 37, ECHR 2002-III).Разумность такой задержки должна определяться с учетом, в частности, сложности исполнительного производства, поведения самого заявителя и компетентных органов, а также суммы и характера судебного решения (см. Raylyan v. Russia, no. /03, 31, 15 февраля 2007 г.). Хотя Суд должным образом учитывает установленные национальным законодательством сроки для исполнительного производства, их несоблюдение не является автоматически нарушением Конвенции. Некоторая задержка может быть оправдана при определенных обстоятельствах, но она ни в коем случае не может нарушать сущность права, защищаемого статьей 6 1 (см. Burdov, упомянутое выше, 35).27. Нельзя ожидать, что лицо, получившее судебное решение против государства, возбудит отдельное исполнительное производство (см. Метаксас против Греции, № 8415/02, 19, 27 мая 2004 г.). В таких случаях государственный орган-ответчик должен быть должным образом уведомлен о судебном решении и, таким образом, имеет все возможности для того, чтобы предпринять все необходимые действия для его выполнения или передать его другому компетентному государственному органу, ответственному за его исполнение. Сложность внутренней исполнительной процедуры или государственной бюджетной системы не может освобождать государство от его обязательства в соответствии с Конвенцией гарантировать каждому право на обязательное и подлежащее исполнению судебное решение, приведенное в исполнение в разумный срок (см. 2), цит. выше, 70). 2. Применение этих принципов к настоящему делу 28. Возвращаясь к настоящему делу, Суд отмечает довод властей Российской Федерации о том, что после получения исполнительных документов Министерством финансов в 2012 г. заявителя без промедления. Насколько можно понять, что они утверждают, что отсрочка исполнения должна была рассчитываться с даты последней подачи судебных приказов в Министерство финансов в начале 2012 года, Суд не может принять этот аргумент.Стороны не оспаривают тот факт, что четыре судебных решения после того, как они стали окончательными и обязательными, оставались неисполненными в течение периодов от восьми лет и девяти месяцев до шести лет и одиннадцати месяцев. Более того, заявитель несколько раз подавал исковые заявления в это же министерство.

9 ПАНИШИН против РОССИИ ПОСТАНОВЛЕНИЕ 7 Однако каждый раз исполнительные документы возвращались ему (см. пункт 7 выше).29. Кроме того, Европейский Суд не может согласиться с доводом властей Российской Федерации о том, что задержки с исполнением судебных решений были оправданы необходимостью обращаться в национальные суды с просьбой разъяснить условия исполнения. Власти запросили эти разъяснения только в 2012 году, то есть через несколько лет после того, как решение суда стало окончательным, и правительство не сослалось на какую-либо причину, по которой такое разбирательство не могло быть возбуждено на более ранней стадии после того, как четыре решения были вынесены. усыновленный.30. Принимая во внимание эти соображения, а также принимая во внимание тот факт, что нарушение в связи с неисполнением решения от 27 июня 2003 г. уже было признано национальным судом на национальном уровне (см. пункт 8 выше) , Суд заключает, что власти не обеспечили своевременное исполнение четырех судебных решений и, таким образом, нарушили право заявителя на суд. Соответственно, имело место нарушение статьи 6 Конвенции. 31. Учитывая, что обязательные и подлежащие исполнению судебные решения создали установленное право на получение платежа в пользу заявителя, которое следует рассматривать как владение по смыслу статьи 1 Протокола №1 (см. Vasilopoulou против Греции, № /99, 22, 21 марта 2002 г. ), власти в течение длительного времени не выполняли эти решения, что помешало ему получить присужденные суммы и, таким образом, нарушило его право на беспрепятственное пользование своим имуществом (см. Burdov, выше, 41). Соответственно, также имело место нарушение статьи 1 Протокола № 1. II. ДРУГИЕ ПРЕДПОЛАГАЕМЫЕ НАРУШЕНИЯ КОНВЕНЦИИ 32. Заявитель также подал другие, не связанные с этим жалобы в соответствии со статьями 6 и 13 Конвенции и статьей 1 Протокола. входящих в его компетенцию, Суд считает, что они не указывают на какие-либо признаки нарушения прав и свобод, изложенных в Конвенции или Протоколах к ней.34. Отсюда следует, что эта часть жалобы является явно необоснованной и должна быть отклонена в соответствии со статьей 35 3 (а) и 4 Конвенции. III. ПРИМЕНЕНИЕ СТАТЬИ 41 КОНВЕНЦИИ 35. Статья 41 Конвенции предусматривает:

10 8 ПОСТАНОВЛЕНИЕ ПО ДЕЛУ ПАНЧИШИН против РОССИИ Если Суд установит, что имело место нарушение Конвенции или Протоколов к ней, и если внутреннее право Заинтересованная Высокая Договаривающаяся Сторона допускает лишь частичное возмещение, Суд, в случае необходимости, предоставляет справедливое удовлетворение пострадавшей стороне. A. Ущерб 36. Заявитель потребовал 15 000 евро в качестве компенсации морального вреда. 37. Правительство оспорило требование, утверждая, что заявитель утратил статус потерпевшего (см. пункт 14 выше). 38. Суд признает, что заявитель испытывал стресс и разочарование из-за того, что власти в течение длительного времени не выполняли долг государства перед ним. Принимая решение на справедливой основе и принимая во внимание все соответствующие факторы (см. Бурдов (№ 2), упомянутое выше), и принимая во внимание сумму, присужденную заявителю национальными судами за отсрочку исполнения, Суд присуждает заявителю евро. 5 270 в отношении морального вреда плюс любой налог, который может быть начислен на него, и отклоняет оставшуюся часть своих требований по этой главе.B. Издержки и расходы 39. Заявитель не требовал возмещения своих издержек и издержек, понесенных перед национальными властями и Судом. Соответственно, Суд не присуждает никакого решения по этому пункту. C. Проценты по умолчанию 40. Суд считает целесообразным, чтобы процентная ставка по умолчанию основывалась на предельной процентной ставке Европейского центрального банка, к которой следует добавить три процентных пункта. ПО ЭТИМ ПРИЧИНАМ СУД ЕДИНОГЛАСНО 1. Признает жалобу в соответствии со статьей 6 Конвенции и статьей 1 Протокола №1 относительно длительного неисполнения четырех решений в пользу заявителя приемлемым, а остальная часть жалобы неприемлемой; 2. Постановил, что имело место нарушение статьи 6 1 Конвенции и статьи 1 Протокола № 1 в связи с длительным неисполнением четырех судебных решений в пользу заявителя;

11 ПАНИШИН против РОССИИ ПОСТАНОВЛЕНИЕ 9 3. Постановил, что (а) государство-ответчик должно выплатить заявителю в течение трех месяцев 5 270 евро (пять тысяч двести семьдесят евро) в качестве компенсации морального вреда плюс любой налог, который может взиматься с заявителя, конвертируется в валюту государства-ответчика по курсу, действующему на дату выплаты; (b) что с истечения вышеупомянутых трех месяцев до выплаты простых процентов на вышеуказанную сумму должны выплачиваться по ставке, равной предельной кредитной ставке Европейского центрального банка в течение периода дефолта плюс три процентных пункта; 4. Отклоняет остальные требования заявителя о справедливой компенсации. Совершено на английском языке и уведомлено в письменной форме 27 ноября 2014 года в соответствии с пунктами 2 и 3 правила 77 Регламента Суда. Сорен Пребенсен Исполняющий обязанности заместителя Секретаря Ханлар Гаджиев Президент

Frontiers | TanP: многофункциональный анионный пептид из яда скорпиона Tityus stigmurus

Введение

Анионные, или кислотные, пептиды представляют собой новый класс пептидов яда скорпиона, которые редко идентифицируются и до сих пор плохо охарактеризованы, но широко представлены в ядовитых железах скорпиона. все обнаруженные виды скорпионов (Shi et al., 2018). Эти молекулы представляют собой пептиды без дисульфидных связей, богатые остатками аспарагиновой и глутаминовой кислот, с изоэлектрической точкой менее 5,0, демонстрирующие высокие гидрофильные свойства и вторичные структуры, состоящие из случайных областей, α-спиральных доменов и спиральных структур (Nie et al. , 2012; Ши и др., 2018).

Относительно рода Tityus сообщалось об обильном присутствии анионных пептидов, при этом было установлено, что 27,22, 7,75, 4,9 и 3,14% от общего количества токсинов экспрессируются в яде скорпионов Tityus stigmurus (Almeida et al., 2012), Tityus serrulatus (Alvarenga et al., 2012), Tityus bahiensis (Oliveira et al., 2015) и Tityus obscurus (de Oliveira et al., 2018) соответственно соответствуют анионным пептиды. Скорпионы Centruroides tecomanus (Valdez-Velázquez et al., 2013), Buthus martensii Karsch (Zeng et al., 2005), Centruroides hirsuti palpus , 20048 palpus (Valdez-Valdez-Valdez-Velázquez- и Mesobuthus eupeus (Baradaran et al., 2018) также показал анионный пептид в составе яда.

В предыдущем исследовании, проведенном нашей исследовательской группой, анионный пептид, присутствующий в ядовитой железе скорпиона T. stigmurus , названный TanP (анионный пептид T. stigmurus ), был впервые охарактеризован с отрицательным зарядом. -20 и теоретической изоэлектрической точкой 2,75. Анализы in vitro продемонстрировали, что TanP обладает хелатирующей активностью ионов Cu 2+ и выявил иммуномодулирующий потенциал, поскольку индуцирует пролиферацию макрофагов и снижает высвобождение оксида азота этими клетками в присутствии липополисахаридов ( ЛПС) (Мело и др., 2017).

Анионные пептиды позвоночных и беспозвоночных животных продемонстрировали противомикробное, иммуномодулирующее и металлохелатирующее действие (Lai et al., 2002; Silva et al., 2009; Segura-Ramirez and Silva Junior, 2018; Zhang et al., 2021). ), которые являются частью системы защиты хозяина у скорпионов и других типов (Valdez-Velázquez et al., 2020). Использование методов металлофармакологии (Flora and Pachauri, 2010) полезно для восстановления нормальной здоровой физиологии организма с широким терапевтическим применением в случаях острой или хронической интоксикации металлами (Andersen, 2004; Ward et al. , 2012; Smith, 2013), нейродегенеративные заболевания (Ward et al., 2012; Ben-Shushan and Miller, 2021), гематологические заболевания (Pretorius et al., 2014; Leitch and Gattermann, 2019), заживление кожных ран (Wright et al., 2014), сердечно-сосудистые заболевания (Smith, 2013) и рак (Yu et al., 2012; Antoniades et al., 2013). Использование малых молекул или хелатирующих пептидов соответствует привлекательной стратегии как для понимания основ биологической регуляции металла, так и для разработки новых методов лечения (Wang and Franz, 2016; Caetano-Silva et al., 2021; Цзэн и др., 2021).

Недавно некоторые исследователи продемонстрировали многофункциональность линейных пептидов, присутствующих у скорпионов (D’Suze et al., 2010; Gao et al., 2010; Guo et al., 2013; Ortiz et al., 2015; Daniele-Silva). et al., 2016, 2021; Guilhelmelli et al., 2016; Ojeda et al., 2016; Cesa-Luna et al., 2019), и была выявлена ​​их антибактериальная, противогрибковая, гипотензивная, противораковая и иммуномодулирующая активность (Zeng et al. , 2012; Almaaytah et al., 2013; Daniele-Silva et al., 2016, 2021; Мачадо и др., 2016; Торрес-Рего и др., 2019 г.; Фуртадо и др., 2020). Однако исследований анионных пептидов этих паукообразных мало. При таком подходе оценка хелатирующей активности TanP проводилась по отношению к новым металлам, имеющим биологическое значение и расширяющим исследование его биологического потенциала.

Материалы и методы

Tityus stigmurus Синтез анионных пептидов (TanP)

Пептид TanP был получен из клона кДНК TSTI0006C, полученного из T.транскриптом stigmurus (Almeida et al., 2012). Синтетический зрелый пептид (YPASFDDDFDALDDLDDLDLDDLLDLEPADLVLLDMWANMMDSQDFEDFE) был получен от Aminotech (Минас-Жерайс, Бразилия) с чистотой выше 90% и хранился при -20°C до момента использования. Тесты на пептиды проводились с разрешения Национальной системы управления генетическим наследием и связанными с ним традиционными знаниями (SisGen) под регистрационным номером AAF17D9 (24 апреля 2018 г. ).

TanP — Анализ реактивности двухвалентных металлов

Реакционную способность TanP с двухвалентными ионами (Fe 2+ и Zn 2+ ) оценивали методом спектроскопии с использованием методологии, описанной Melo et al.(2017). Вкратце, TanP (25 мкМ) в отсутствие или в присутствии ионов (Fe 2+ и Zn 2+ ) при возрастающих концентрациях (0–175 мкМ) инкубировали при комнатной температуре (25°C) в течение 5 мин. Затем измеряли оптическую плотность смеси в диапазоне от 190 до 800 нм в кварцевой кювете (оптический путь 1 см) с использованием спектрофотометра Agilent 8453 UV-Visible Spectroscopy System (Agilent, Санта-Клара, Калифорния, Соединенные Штаты Америки) с Детектор ДАД. Электронные спектры генерировали для оценки комплексообразования.Стехиометрическое соотношение для комплекса было получено из экстраполяционного расчета линий, равных значениям оси у каждого из уравнений линий, таким образом, получено значение х, соответствующее концентрации металла в образце. .

Эмиссионная флуоресцентная спектрофотометрия

Спектры флуоресценции регистрировали на спектрофлуориметре (RF-5301PC, модель Shimadzu, Япония) с длиной волны возбуждения 280 нм. Спектр излучения регистрировали в диапазоне 300–500 нм.Все измерения проводились при широких щелях возбуждения и излучения, равных 1,5 и 15 нм соответственно. Образец TanP (1,12 мкМ) титровали возрастающими концентрациями ионов Fe 2+ (0–47,7 мкМ) или Zn 2+ (0–50 мкМ), полученных из FeSO 4 ·7H 2 растворы O или ZnCl 2 соответственно. После 5 минут добавления ионов были получены спектры излучения флуоресценции, и результаты были выражены как интенсивность флуоресценции по сравнению с интенсивностью флуоресценции.длина волны (нм) (Croney, 2001; Caetano-Silva et al., 2017). Все образцы измеряли в кварцевой кювете (длина оптического пути 1 см). При титровании ионов железа и цинка было получено 12 и 14 спектров соответственно.

Вычислительные методы

Теоретические расчеты были сосредоточены на предложении вероятного механизма взаимодействия между металлическим центром и TanP, в частности, через их карбоксилатные группы, принадлежащие боковым цепям остатков аспартата и глутамата. Предыдущие экспериментальные результаты для ионов Cu 2+ и TanP показывают, что этот процесс хелатирования происходит через карбоксилатные пары, расположенные по всей третичной структуре (Melo et al., 2017). Следовательно, была предпринята попытка модели комплексообразования между парой ацетатов, молекулами воды и ионами металлов (Fe 2+ и Zn 2+ ) для поддержки и понимания хелатирующего эффекта. Использование ацетата для описания взаимодействия Asp/металлы возможно, так как разница в локальной электронной плотности минимальна, а место взаимодействия остается прежним.Конформационный поиск проводили с использованием Conformer-Rotamer Ensemble Sampling Tool CREST версии 2.10.2 (Pracht et al., 2020) с программным пакетом xtb (Bannwarth et al., 2021). Полуэмпирический метод квантовой химии на основе сильной связи GFN2-xTB использовался в рамках метадинамики для глобального исследования конформеров (Grimme, 2019). Лучший конформер для каждого металла был подвергнут оптимизации геометрии по теории функционала плотности (DFT) на уровне BP86 (Perdew, 1986; Becke, 1988)/def2-TZVP (Perdew, 1986; Becke, 1988; Weigend and Ahlrichs, 2005). теория в неявном растворителе (вода) с использованием модели поляризуемого континуума (IEFPCM) (Scalmani and Frisch, 2010).После оптимизационных расчетов модель TD-DFT (Pracht et al., 2020) для предсказания вертикальных энергий перехода первого возбужденного состояния была выполнена на CAM-B3LYP (Yanai et al., 2004)/def2-TZVP. Кроме того, были также проведены анализы естественных связных орбиталей (NBO) (Foster and Weinhold, 1980; Reed and Weinhold, 1983) и естественных переходных орбиталей (NTO) (Martin, 2003), чтобы получить более интуитивное представление о молекулярных орбиталях. Программа Gaussian 16 использовалась для всех вычислений DFT (Frisch et al., 2016).

Гемолитическая активность

Гемолитический эффект TanP был определен ранее de Menezes et al. (2014 г.) с изменениями. Вкратце, суспензию 1% (об./об.) эритроцитов здорового человека (группа крови O + Rh + ) инкубировали с TanP (1,56–50 мкМ) в течение 1 ч при 37°C. По истечении этого периода образцы центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 мин при 25°C (Eppendorf ® 5424 R, Германия). Затем 200 мкл супернатанта переносили в 96-луночный микропланшет и измеряли поглощение гемоглобина при 540 нм с помощью устройства для чтения микропланшетов (Epoch-Biotek ® , Вермонт, США).Triton X-100 1% (об./об.) и фосфатно-солевой буфер (137 мМ NaCl, 3 мМ KCl, 1,5 мМ KH 2 PO 4 и 10 мМ Na 2 HPO 4 ; рН, 7.4) использовали в качестве положительного контроля (100% гемолиз) и отрицательного контроля (0% гемолиз) соответственно. Результаты выражали как процент лизиса эритроцитов по сравнению с положительным контролем (100% лизис). Проект по использованию крови здорового донора был ранее одобрен комитетом по этике исследований Больницы Университета Онофре Лопес-Хуол/UFRN под номером 3127063.

In Vitro Антиоксидантная активность
Анализ удаления 1,1-дифенил-2-пикрилгидразила

Активность удаления радикалов 1,1-дифенил-2-пикрилгидразила (DPPH) оценивала способность TanP отдавать водород или поглощать радикал DPPH в растворе этанола. Этот метод основан на восстановлении радикала DPPH (очень нестабильный радикал азота и фиолетового цвета). При взаимодействии с редуцирующими веществами, т. е. антиоксидантами, превращается в дифенилпикрилгидразин (ДФПГ-Г) желтого цвета.Эффект удаления радикалов DPPH измеряли с использованием метода, описанного Melo-Silveira et al. (2014 г.) с изменениями. Вкратце, 100 мкл TanP (1–25 мкМ) смешивали со 100 мкл этанольного раствора DPPH (150 мкМ) и инкубировали в течение 30 мин в защищенном от света месте при комнатной температуре (25°C). После инкубации измеряли оптическую плотность при 517 нм. Активность DPPH по удалению свободных радикалов (DPPH-FSA) определяли с использованием следующего уравнения, где контрольный образец представляет собой раствор этанола, а контрольный контроль представляет собой раствор DPPH:

DPPH-FSA (%)=[1– (поглощение образца −абсорбция холостого образца) (абсорбция контроля − абсорбция контрольного бланка)]X 100
Анализ удаления гидроксильных радикалов

Эффект TanP на удаление гидроксильных радикалов исследовали с использованием реакции Фентона (Fe 2+ + H 2 O 2 → Fe 3+ + OH + OH•), как описано ранее в литературе, с небольшими изменениями (Melo-Silveira et al. , 2014). В 96-луночных микропланшетах TanP (1–73,6 мкМ) инкубировали с раствором реагентов [10 мМ сульфата железа, 10 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), 2 мМ салицилата натрия и 30% перекиси водорода в 150 мМ натрий-фосфатном буфере; pH 7,4], при 37°C в течение 60 мин, что приводит к образованию гидроксильного радикала. Затем измеряли поглощение гидроксильных радикалов при 510 нм. Пробирки в отсутствие перекиси водорода использовали в качестве контрольных пробирок. Результаты выражали в процентах удаления по сравнению со стандартной галловой кислотой (0,25–2 мг/мл).

Анализ удаления супероксидных радикалов

Активность удаления супероксидных радикалов определяли, как описано Melo-Silveira et al. (2014). Реакционную смесь, содержащую TanP в различных концентрациях (1–25 мкМ), 50 мМ натрий-фосфатный буфер (рН 7,4), 65 мМ метионин, 0,5 мМ ЭДТА, 0,375 хлорида нитротетразолия синего и 0,5 мМ рибофлавин, подвергали 15-минутному освещению при люминесцентная лампа. Изменение цвета измеряли (560 нм) с помощью спектрофотометра. Готовили контрольную и контрольную смеси. Заготовка была защищена от света. Результаты выражали в процентах активности по удалению гидроксильных радикалов, как показано в предыдущем уравнении.

% удаления радикалов = [(поглощение контроля — поглощение образца) (поглощение контроля — поглощение бланка)] X 100 модификации (Wang et al., 2008). Образцы TanP (1–25 мкМ) добавляли к реакционному раствору (2 мМ FeCl 2 и 5 мМ феррозина) и инкубировали в течение 10 мин при 37°C.Поглощение измеряли при 562 нм. Хелатирующую активность выражали как процент хелатирования по отношению к холостой пробе (отсутствие образца). ЭДТА (0,1 мг/мл) использовали в качестве положительного контроля.

Анализ хелатирования меди

Тест на хелатирование меди проводили, как описано ранее (Presa et al., 2018). Вкратце, 96-луночные микропланшеты с реакционной смесью, содержащей различные концентрации TanP (1–25 мкМ), пирокатехинового фиолетового (4 мМ) и пентагидрата сульфата меди II (50 мг/мл), гомогенизировали с помощью микропипетки. и поглощение раствора измеряли при 632 нм с использованием устройства для считывания микропланшетов (SpectraMax ® M2/M2e, Molecular Devices, Сан-Хосе, Калифорния, Соединенные Штаты Америки).

Анализ восстановительной способности

Восстанавливающую способность образцов исследовали в соответствии с Presa et al. (2018). Вкратце, образцы различных концентраций (1–25 мкМ) добавляли к раствору 200 мМ натрий-фосфатного буфера (pH 6,6) и феррицианида калия (10 мг/мл). После инкубации на водяной бане при 50°C в течение 20 мин добавляли трихлоруксусную кислоту (10% масс./об.) и хлорид железа III (0,1% масс./об.). Смесь перемешивали и измеряли оптическую плотность (700 нм) с помощью устройства для считывания микропланшетов.Результаты выражали в виде процента активности, наблюдаемой для 0,1 мг/мл (самая высокая активность) аскорбиновой кислоты.

Определение антикоагулянтной активности

Тест протромбинового времени

Действие TanP на внешний путь свертывания оценивали с помощью теста протромбинового времени (PT), как ранее описано в литературе, с модификациями (Félix-Silva et al. , 2014). ). Тест проводился с использованием коммерческих наборов реагентов (CLOT Bios Diagnostica®, Сан-Паулу, Бразилия).Плазму (70 мкл) смешивали с 30 мкл TanP (2, 12,5 и 25 мкМ) и инкубировали при 37°C в течение 5 мин. Затем добавляли 200 мкл реагента для анализа PT (экстракт мозга кролика и хлорид кальция), предварительно подогретого при 37°C в течение 10 мин, и записывали время свертывания с помощью цифрового коагулометра («Laser Sensor» Clotimer, CLOT, São Пауло, Бразилия). В качестве контроля использовали только плазму (только с носителем) (при отсутствии антикоагулянтной активности). В качестве положительного контроля использовали плазму с гепарином (1 МЕ/мл) (Cristalia®, Сан-Паулу, Бразилия).

Тест активированного частичного тромбопластинового времени

Действие TanP на внутренние и общие пути коагуляционного каскада оценивали с помощью анализа активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ), как описано ранее в литературе, с модификациями (Félix-Silva et al. , 2014). Тест проводился с использованием коммерческих наборов реагентов (CLOT Bios Diagnostica). Плазму (70 мкл) смешивали с 30 мкл TanP (2, 12,5 и 25 мкМ) и инкубировали при 37°C в течение 5 мин. Затем добавляли 50 мкл предварительно нагретого реагента аЧТВ (экстракт мозга кролика и эллаговая кислота) и инкубировали при 37°C в течение 3 мин.После инкубации к предварительно подогретому (37°C) добавляли 50 мкл 25 мМ хлорида кальция и регистрировали время свертывания с помощью цифрового коагулометра («Laser Sensor» Clotimer, CLOT). Плазму отдельно (только с носителем) использовали в качестве контроля (при отсутствии антикоагулянтной активности). Плазму с гепарином (1 МЕ/мл) (Cristalia ® ) использовали в качестве положительного контроля.

Фибринолитическая активность

Влияние TanP на фибриноген оценивали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) (Félix-Silva et al., 2014). Условия разделения: напряжение 130 В, сила тока 50 мА и мощность 90 Вт. Различные концентрации TanP (2–178 мкМ) смешивали с 50 мкг фибриногена (2 мкг/мкл) и затем инкубировали в течение 240 мин при 37°C. Реакцию останавливали, добавляя 25 мкл буфера для образцов, содержащего 10 % β-меркаптоэтанола и 2 % SDS, с последующим кипячением в течение 5 минут и подвергали SDS-PAGE (12%). Паттерн гидролиза фибриногена визуализировали путем окрашивания Кумасси бриллиантовым синим R-250. Только фибриноген использовали в качестве контроля для визуализации интактного профиля фибриногена.Яд Bothrops leucurus (10 мкг) использовали в качестве положительного контроля фибриногенолитической активности. Образец, содержащий только пептид в самой высокой концентрации (178 мкМ), использовали в качестве контроля. Затем гель был оцифрован, а изображение бинаризировано для измерения площади одной из полос, относящихся к деградации фибриногена, с использованием программного обеспечения ImageJ 1.44p (Национальные институты здравоохранения, Мэриленд, Соединенные Штаты Америки).

In Vitro Иммуномодулирующая активность

Первоначально цитотоксичность TanP с помощью метода бромида 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия (MTT) снижается до RAW 264.Было оценено 7 клеток. Иммуномодулирующую активность оценивали путем количественного определения уровней цитокинов IL-6 и TNF в супернатанте культуры макрофагов RAW 264.7, обработанных TanP, в присутствии и в отсутствие LPS (2 мкг/мл, из Escherichia coli , серотип O111:B4, Sigma -Aldrich®, Сент-Луис, США). В 24-луночных микропланшетах клетки RAW 264.7 (3 × 10 5 клеток/лунку) культивировали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) в течение 24 ч при 37°C при температуре атмосфера 5% CO 2 .По истечении этого периода среду отсасывали и добавляли TanP в различных концентрациях (2–25 мкМ) в отсутствие или в присутствии ЛПС (2 мкг/мл). Планшет выдерживали в ранее описанных условиях в течение 24 ч, и культуральную среду собирали для количественного определения уровня цитокинов в супернатанте. Цитокины количественно определяли с помощью ELISA с использованием набора eBioscience® (Сан-Диего, США) в соответствии с методологией, описанной производителем. Результаты выражали в пикограммах на миллилитр.

Жизнеспособность клеток 3T3 (ATCC CCL-92)

Анализ МТТ использовали для оценки жизнеспособности клеток фибробластов 3T3 (ATCC CCL-92) в присутствии TanP (Mosmann, 1983). Клеточная линия 3T3 (ATCC CCL-92) была любезно предоставлена ​​доктором Кармен Феррейра (Отдел биохимии, UNICAMP, Сан-Паулу, Бразилия). Вкратце, клетки 3T3 высевали в 96-луночный планшет (5 × 10 3 клеток/лунку) и инкубировали в среде DMEM с 10% FBS при 37°C с насыщением 5% CO 2 .По истечении этого периода добавляли TanP в различных концентрациях (5–50 мкМ) и инкубировали в течение 24 часов. Затем пептид удаляли, добавляли 100 мкл МТТ (5 мг/мл) в среде и дополнительно инкубировали в течение 4 ч при 37°C. Супернатанты удаляли и заменяли 100 мкл этанола для растворения кристаллов формазана. Измерения проводились при 570 нм с использованием устройства для считывания микропланшетов (Epoch-BioTek ® ). Результаты были представлены в виде процента снижения МТТ, принимая поглощение отрицательного контроля (планшет без добавления пептида) за 100% снижение.

In Vitro Анализ ран с царапинами

Клетки 3T3 высевали в 24-луночный планшет и инкубировали в DMEM с 10% FBS до тех пор, пока слияние клеток не достигало примерно 80–90%. Клетки далее выращивали в течение следующих 24 часов при 37°C в инкубаторе с 5% CO 2 . С помощью стерильного наконечника пипетки объемом 200 мкл создавали равномерную царапину. Для удаления рыхлых клеток лунки промывали PBS (рН 7,4). Затем поцарапанные клетки обрабатывали различными концентрациями TanP (2–50 мкМ).В качестве отрицательного контроля использовали лунки, содержащие только культуральную среду. Чтобы контролировать закрытие поражения, изображения были получены с использованием инвертированного микроскопа Nikon Eclipse с 10-кратным объективом через 0, 12 и 24 часа после инкубации с TanP. Площадь царапины анализировали с помощью программы NIS-Elements AR, считая результаты в процентах закрытия поражения по отношению к исходной площади (Balekar et al., 2012; Tonin et al., 2016).

Статистический анализ

Статистический анализ выполнен с использованием программного обеспечения GraphPad Prism (версия 7.0, GraphPad, Сан-Диего, США). Все эксперименты проводились не менее чем в трехкратной повторности. Анализ данных проводили с использованием однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим тестом Тьюки. Данные выражали как среднее ± стандартное отклонение (SD) и считали значимыми, когда p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001 и **** p < 0,0001. Для экспериментального определения металлов использовали программу OriginPro 8.5 для построения графиков.

Результаты

Металлохелатирующие свойства TanP

Анализы реакционной способности TanP с помощью УФ-видимой спектрометрии с различными концентрациями ионов металлов представлены на рис. максимум поглощения при 255 и 275 нм (дополнительный рисунок S1). При добавлении FeSO 4 ·7H 2 O произошли изменения профиля спектра пептида в области максимального поглощения от 255 до 275 нм, что свидетельствует об образовании комплекса TanP-Fe 2+ .Для Zn 2+ соответствующего спектрального изменения отмечено не было. Как показано на дополнительном рисунке S2, первоначально в присутствии Fe 2+ поглощение увеличивалось линейно, а затем становилось стабильным, демонстрируя стехиометрию 1: 5 для комплекса (TanP: Fe 2+ ).

РИСУНОК 1 . Спектры поглощения TanP (25 мкМ) в УФ-видимой области при добавлении различных концентраций (А) Fe 2+ и (Б) Zn 2+ , кривые а–о (0–175 мкМ) .

Предложить способ взаимодействия TanP с ионами Fe 2+ и Zn 2+ следующие [Fe(Ac.) 2 (H 2 O) 4 ] и [Zn( Ac. ) 2 (H 2 O) 2 ] комплексы использовали после конформационного поиска. Полученная геометрия для комплексов Zn 2+ и Fe 2+ представляет тетраэдрическую и октаэдрическую формы соответственно (дополнительная фигура S3). Для Zn 2+ две молекулы воды и по одной молекуле кислорода каждого ацетата расположены в вершинах тетраэдрической структуры.Углы между этими четырьмя лигандами, проходящими через металлический центральный атом, имеют в среднем 108,7°, что характеризует эту геометрию, и среднее расстояние 2,0 Å. Как и на комплексах Zn 2+ , дикатион железа также взаимодействует с одним атомом кислорода каждого ацетаткарбоксилата; однако четыре молекулы воды присутствуют на первой гидратной оболочке и образуют октаэдрический комплекс. Средние углы между соседними и противоположными атомами кислорода составляли 90,0° и 174,5° соответственно на среднем расстоянии 2.0 Å от центрального атома.

Теоретические спектры поглощения двух комплексов [Fe(Ac. ) 2 (H 2 O) 4 ] и [Zn(Ac.) 2 (H 2 O) 2 ] 901 показаны на дополнительном рисунке S4. Эти спектры были смоделированы для спектрального диапазона длин волн от 170 до 300 нм, что соответствует спектральному окну, используемому для получения экспериментальных данных (дополнительный рисунок S1). Все вертикальные переходы, рассчитанные для двух комплексов, охарактеризованы (длина волны, сила осциллятора и типы орбиталей, участвующих в переходах) и перечислены в дополнительной таблице S1.Как видно из дополнительной фигуры S4 и дополнительной таблицы S1, в то время как комплекс [Zn(Ac.) 2 (H 2 O) 2 ] представляет девять возбужденных состояний (между 172 и 212 нм), [ Комплекс Fe(Ac.) 2 (H 2 O) 4 ] имеет 20 возбужденных состояний (между 171 и 255 нм). NTO основного возбужденного состояния для [Fe(Ac.) 2 (H 2 O) 4 ] и [Zn(Ac. ) 2 (H 2 O) 2 ] комплексы показаны на дополнительной фигуре S4.

С одной стороны, эти девять возбужденных состояний комплекса [Zn (Ac.) 2 (H 2 O) 2 ] описываются в основном переходами высших занятых молекулярных орбиталей (ВЗМО, ВЗМО- 1 и HOMO-2) с центром на карбоксилатном лиганде (орбитали типа n ) до низших незанятых молекулярных орбиталей (НСМО, НСМО+1 и НСМО+2), также связанных с фрагментом ацетатного лиганда (орбитали типа π*) . С другой стороны, для комплекса [Fe (Ac.) 2 (H 2 O) 4 ] наиболее важные возбужденные состояния описывают полосу низкой интенсивности (между 185 и 220 нм), что приводит к в основном за счет почти изоэнергетических переходов, происходящих с 3d-орбиталей (ВЗМО, ВЗМО-1 и ВЗМО-2), расположенных в металлическом центре, на орбитали типа π*, расположенные на ацетатном лиганде (НСМО+3 и НСМО+4).

В спектрах флуоресцентного излучения TanP (1,12 мкМ) обнаружил интенсивную полосу излучения с λ max около 353 нм при возбуждении на 285 нм, что согласуется с диапазоном излучения триптофана (Trp) (дополнительная фигура S5). Интенсивность флуоресценции TanP (1,12 мкМ) уменьшилась после добавления Fe 2+ (рис. 2А). Самое высокое соотношение 1:7,4 (TanP: Fe 2+ ) привело к самой низкой интенсивности флуоресценции, согласно значению, полученному на графике относительно спектральных изменений полосы излучения в зависимости от концентрации иона металла ( Рисунок 2Б).Никаких изменений в эмиссии флуоресценции TanP не было отмечено при добавлении Zn 2+ (дополнительная фигура S6).

РИСУНОК 2 . Тушение эффектов Fe 2+ на интенсивность флуоресценции TanP (1,12 мкМ) с λ ex = 280 нм. (A) Добавление иона железа, кривые a–l (0–47,7 мкМ). (B) Интенсивность флуоресценции TanP при 353 нм с повышенным Fe 2+ .

Гемолитическая активность

TanP показал низкую гемолитическую активность для всех тестируемых концентраций (1.56–50 мкМ) с гемолитической активностью 3% при оценке в самой высокой концентрации (50 мкМ), что свидетельствует о том, что пептид не вызывал значительного эффекта гемолиза в эритроцитах in vitro (рис. 3).

РИСУНОК 3 . Гемолитическая активность TanP in vitro . Был протестирован TanP (1,56–50 мкМ), статистическая значимость была определена с использованием ANOVA с последующим тестом Тьюки и выражена как среднее значение ± стандартное отклонение (n = 3). *** p < 0,001 по сравнению с группой положительного контроля (Тритон-Х).

In Vitro Антиоксидантный потенциал TanP

TanP показал низкую активность (менее 5%) в трех различных тестах: восстанавливающая способность, удаление супероксидных радикалов и тест на хелатирование меди (данные не показаны). С другой стороны, TanP проявлял активность по удалению радикалов DPPH выше 70% при всех концентрациях (1–25 мкМ) (рис. 4А). В тесте на хелатирование ионов железа TanP показал активность 89,7% (рис. 4B) при оценке в самой высокой концентрации (25 мкМ). Кроме того, ТанП (73.6 мкМ) продемонстрировал 96% активности по удалению гидроксильных радикалов (рис. 4C).

РИСУНОК 4 . Оценка антиоксидантной активности TanP. (A) DPPH емкость для удаления радикалов. В качестве контроля использовали раствор DPPH (150 мкМ). (B) Способность хелатировать железо. ЭДТА (0,1 мг/мл) использовали в качестве контроля. (C) Активность TanP по удалению гидроксильных радикалов. Галловая кислота (0,25–2 мг/мл) использовалась в качестве контроля. Статистическую значимость определяли с использованием ANOVA с последующим тестом Тьюки и выражали как среднее значение ± стандартное отклонение (n = 3).* p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001 и ****p < 0,0001 по сравнению с контрольной группой.

Оценка антикоагулянтной активности

In Vitro

Антикоагулянтную активность TanP оценивали с помощью анализов протромбинового времени и аЧТВ с использованием нормальной цитратной плазмы человека. В обоих анализах TanP выявил антикоагулянтный эффект при концентрациях 12,5 и 25 мкМ (рис. 5). В анализе TP время свертывания 20 и 22.5 с было найдено для концентраций 12,5 и 25 мкМ соответственно (фиг. 5А). В анализе aPTT было обнаружено время свертывания 53,4 и 58,4 с для концентраций 12,5 и 25 мкМ соответственно (Фигура 5B). Плазма с гепарином использовалась в качестве положительного контроля и, как и ожидалось, проявляла значительную антикоагулянтную активность с PT выше 60 с (секунды отрицательного контроля: 16,27 ± 0,32) и aPTT выше 240 с (секунды отрицательного контроля: 35,07 ± 0,03). ).

РИСУНОК 5 .Оценка коагулянтной активности TanP in vitro . (A) PT и (B) анализы аЧТВ. Статистическую значимость определяли с использованием ANOVA с последующим тестом Тьюки и выражали как среднее значение ± стандартное отклонение (n = 3). * p < 0,05, ** p < 0,01 и *** p < 0,001 по сравнению с группой отрицательного контроля (плазма без TanP).

В дополнение к антикоагулянтной активности TanP также тестировали на способность гидролизовать фибрин и фибриноген с целью изучения его потенциала в качестве тромболитического агента. В оцениваемых концентрациях TanP не проявлял фибриногенолитической активности (данные не показаны).

Влияние TanP на высвобождение цитокинов

TanP (2–25 мкМ) не снижал жизнеспособность клеток RAW 264.7 при инкубации в течение 24 ч, что указывает на нетоксический характер этой клеточной линии (дополнительный рисунок S7). Пептид индуцировал отчетливый профиль высвобождения провоспалительных цитокинов TNF-α и IL-6 в отсутствие LPS. Увеличение экспрессии TNF-α 316,26 и 622.56 пг/мл наблюдали в супернатанте культуры мышиных макрофагов в присутствии 12,5 и 25 мкМ TanP соответственно, что свидетельствует о зависимой от концентрации зависимости (Фигура 6A). Значимых изменений уровней IL-6 не наблюдалось (рис. 6В). В присутствии ЛПС TanP (2–25 мкМ) не вызывал изменений профиля высвобождения цитокинов TNF-α и IL-6 при инкубации в течение 24 часов.

РИСУНОК 6 . Влияние TanP на уровни провоспалительных цитокинов в мышиных макрофагах (RAW 264.7) супернатант. Высвобождение цитокинов (A) TNF-α и (B) IL-6 в присутствии или в отсутствие LPS. Уровни секреции цитокинов клетками измеряли через 24 ч после взаимодействия с ЛПС (2 мкг/мл) и/или при различных концентрациях TanP (0–25 мкМ). Статистическую значимость определяли с использованием ANOVA с последующим тестом Тьюки и выражали как среднее значение ± стандартное отклонение (n = 3). * p < 0,05 и *** p < 0,001 по сравнению с группой отрицательного контроля (клетки без TanP или LPS) или группой положительного контроля (клетки только с LPS).

Жизнеспособность клеток 3T3

TanP (2–50 мкМ) не индуцировал пролиферацию клеток 3T3 и не снижал их жизнеспособность при инкубации в течение 24 часов, что указывает на нетоксический характер этой клеточной линии (дополнительный рисунок S8).

Оценка целебного потенциала TanP с использованием анализа миграции клеток

На рис. 7 показано влияние обработки TanP в различных концентрациях (2–50 мкМ) в моменты времени 0, 12 и 24 ч в отношении миграции фибробластов методом царапин.

РИСУНОК 7 . Миграция клеток 3T3, обработанных TanP, после анализа Scratch. Слияние фибробластов после царапания и обработки различными концентрациями TanP (0–50 мкМ) анализировали через 0, 12 и 24 часа. Площади измерялись с помощью программы NIS-Elements AR. Статистическую значимость определяли с использованием ANOVA с последующим тестом Тьюки и выражали как среднее значение ± стандартное отклонение (n = 3). *p < 0,05 и **p < 0,01 по сравнению с контрольной группой (без TanP).

При сравнении измерений площадей царапин значительное увеличение процента закрытия поражений наблюдалось после 24 часов инкубации с пептидом для всех концентраций, оцениваемых по отношению к контрольной группе. Кроме того, в присутствии TanP (2 мкМ, 12,5 и 50 мкМ) приблизительно 50 % раны закрывались через 24 часа лечения, тогда как в контрольной группе это закрытие составляло только 30 %.

Обсуждение

Высокие концентрации ионов Fe 2+ и Cu 2+ вызывают реакцию этих металлов с молекулярным кислородом с образованием активных форм кислорода (АФК), которые повреждают ДНК, липиды и белки (Di Bella et al. , 2017). Кроме того, рак, диабет, атеросклероз, воспалительные заболевания, аутоиммунные заболевания, сердечно-сосудистые заболевания и болезнь Альцгеймера связаны с увеличением АФК или неспособностью организма снижать содержание этих реактивных частиц (Nascimento et al., 2013). Разработка многофункциональных молекул, в том числе натуральных продуктов, способных одновременно бороться с несколькими патологическими характеристиками, выступая в качестве хелатирующих агентов, антиоксидантов, противовоспалительных средств и средств, уменьшающих агрегацию пептидов, считается новой перспективой для лечения нейродегенеративных заболеваний (Sales и другие., 2019). В этом контексте компоненты, присутствующие в яде скорпиона, продемонстрировали противовоспалительное (Veloso Junior et al., 2019), хелатирующее (Melo et al., 2017) и антиоксидантное действие (Daniele-Silva et al., 2021), составляя перспективный источник для разработки новых лекарств.

В этом исследовании TanP выявил значительное сродство к железу (II), биологически важному иону металла, но не показал аналогичного профиля сродства по отношению к металлу цинку (II) в наблюдаемых экспериментальных условиях (рис. 1).

Комплексообразование с ионами Fe 2+ обычно связано с получением соединения октаэдрической геометрии. Координационные центры с участием доноров серы, азота и кислорода способствуют этому взаимодействию (Bal et al., 2013; Antonietti et al., 2017). В литературе предполагается, что сайтами связывания металлов в железохелатирующих пептидах могут быть также карбоксильные группы аспарагиновых и глутаминовых остатков (Lv et al., 2009; Caetano-Silva et al., 2018), концевые аминогруппы. и карбоксилатные группы, и пептидные связи пептидной структуры, а также амино- и аргинимин-, лизин-амино- и гистидин-имин.Кроме того, было обнаружено, что отсутствие этих аминокислотных остатков в пептидной цепи приводит к меньшему железохелатирующему потенциалу (Wu et al., 2017). Таким образом, предполагается, что ионы Fe 2+ образуют комплекс с TanP, возможно, за счет связывания с атомами кислорода карбоксилатных групп боковых цепей аспарагиновой и глутаминовой кислот.

Тетраэдрическая геометрия, полученная для комплекса [Zn(Ac. ) 2 (H 2 O) 2 ] в вычислительном анализе этого исследования, выявила конфигурацию, обычно получаемую для комплексов цинка, в основном биокомплексов. поскольку ион цинка взаимодействует с донорами, такими как кислород и азот боковых цепей фермента, с образованием более прочных комплексов (Krezel and Maret, 2016).Что касается геометрии, полученной для комплекса [Fe(Ac.) 2 (H 2 O) 4 ], она соответствует нескольким комплексам железа, которые образуют октаэдрическую форму в водной среде, включая биологические молекулы, такие как группа гема (Poulos, 2014).

Наш анализ NBO (дополнительная фигура S9, S10 и S11) показывает, что в то время как для комплекса [Fe(Ac.) 2 (H 2 O) 4 ] 3d-орбитали металлического центра установлен вблизи граничных орбиталей ВЗМО-НСМО, для [Zn(Ac.) 2 (H 2 O) 2 ] 3d-орбитали цинка далеки от граничных орбиталей. Тогда, учитывая участие соответствующих молекулярных орбиталей, для комплекса [Zn(Ac.) 2 (H 2 O) 2 ] возбужденные состояния можно отнести в основном к переходам с участием именно орбиталей аспартатного лиганда . Напротив, для комплекса [Fe(Ac.) 2 (H 2 O) 4 ] основная полоса поглощения может быть отнесена в основном к переносу заряда от металла к лиганду.Эти теоретические результаты показывают, что с помощью УФ-видимой спектроскопии: 1) TanP может работать как датчик для идентификации и количественного определения (при оцененных концентрациях) ионов железа (II); и 2) TanP, по-видимому, не обладает чувствительностью к двухвалентному цинку (при оцененных концентрациях и рассматриваемом спектральном диапазоне).

Конформационные изменения белков можно отслеживать с помощью флуоресцентных зондов или собственной флуоресценции, которая вызывается остатками ароматических аминокислот (триптофан, тирозин и фенилаланин) (Жданова и др. , 2015). В первичной последовательности TanP содержит один остаток тирозина, три остатка фенилаланина и один остаток триптофана, которые способствуют собственной флуоресценции пептида.

При оценке с помощью флуоресцентной спектроскопии TanP показал интенсивную полосу излучения с λ max около 353 нм при возбуждении на 285 нм (дополнительный рисунок S5), что подтверждает максимальную длину излучения триптофана, которая варьируется от 310 до 350 нм, в зависимости от электростатической среды (Adams et al., 2002). Для других хромофоров, аминокислот тирозина и фенилаланина, спектр излучения находится в диапазоне 290 нм, который перекрывается со спектром поглощения триптофана, вызывая передачу энергии от этих аминокислот к триптофану, что делает этот хромофор доминирующим в процессе флуоресценции. пептидов и белков (Жданова и др., 2015).

Изменения, наблюдаемые в полосах излучения TanP в присутствии Fe 2+ , подтверждают результаты, полученные в УФ-видимой спектроскопии. Более низкая концентрация TanP (1,12 мкМ) координирует большее количество ионов железа, 1:7,4 (TanP:Fe 2+ ). Аналогичное соотношение (TanP:металл) было сообщено в исследовании меди в УФ-видимой области для концентрации пептида 2,11 мкМ с упоминанием соотношения 1:7 (TanP:Cu 2+ ) (Melo et al., 2017). . Кроме того, можно предположить, что металл связывается с сайтом, близким к аминокислоте триптофан.

В литературе сообщалось о присутствии молекул с антиоксидантным действием у скорпионов (Wali et al., 2020). Стигмурин (FFSLIPSLVGGLISAFK-Nh3), катионный пептид T. stigmurus , продемонстрировал поглощение гидроксильных радикалов выше 70% при 10 мкМ (Daniele-Silva et al., 2021). Было показано, что пептидная фракция, выделенная из яда Buthus occitanus , проявляет антиоксидантное действие и действие поглотителя свободных радикалов (Bekheet et al., 2013). Антиоксидантные пептиды из B. martensii Karsch были выделены и очищены и показали самую высокую активность по удалению ABTS + и самую высокую активность по удалению DPPH, но активность этих пептидов по удалению ОН была незначительной (Wali et al. , 2020).

Процесс окисления субстрата состоит из трех стадий (инициация, распространение и завершение). Антиоксиданты могут действовать на любой из этих стадий, и чем больше стадий проходит соединение, тем лучше оно является антиоксидантом (Wali et al., 2020). Доступно несколько тестов на антиоксиданты in vitro для оценки антиоксидантной активности биомолекул (Gulcin, 2020). В этом текущем исследовании мы использовали шесть методов для оценки возможного влияния TanP на этапы инициации (DPPH, хелатирование железа и меди), распространения (снижение мощности) и прекращения (активности по удалению супероксидных и гидроксильных радикалов).

В этом подходе TanP продемонстрировал значительную железохелатирующую активность, достигнув более 90% хелатирования (рис. 4B), став пионером в демонстрации антиоксидантного потенциала анионных пептидов, присутствующих в яде скорпиона. Хелатирование металлического железа оказывает антиоксидантное действие, поскольку железо переходного металла, как и медь, катализирует образование АФК, включая гидроксильный радикал и супероксидный радикал, что приводит к окислению ненасыщенных липидов и способствует окислительному повреждению на разных уровнях (Nascimento et al. , 2013).

Среди АФК гидроксильный радикал является наиболее реакционноспособным в химии. Он может отрывать атомы водорода от молекул биологических тиолов и образовывать радикалы серы, способные соединяться с кислородом с образованием радикалов оксисеры и повреждать биологические молекулы (Singh and Singh, 2008; Melo-Silveira et al., 2012).

В целом, TanP показал антиоксидантный эффект на двух разных стадиях процесса окисления субстрата; инициация (восстановление DPPH и хелатирование ионов) и прекращение (удаление гидроксильных радикалов) (рис. 4).

Различные аминокислотные остатки могут быть ответственны за антиоксидантную активность пептидов, которая обычно связана с хелатированием переходных металлов и удалением свободных радикалов (Carrasco-Castilla et al., 2012). Высокое содержание гидрофобных аминокислот в пептидах в основном отвечает за антиоксидантную активность (Wali et al., 2020). Кроме того, нуклеофильные серосодержащие боковые цепи в остатках цистеина и метионина и ароматические боковые цепи в остатках триптофана, тирозина и фенилаланина могут легко отдавать атомы водорода (Carrasco-Castilla et al. , 2012). В своем составе TanP имеет 23 гидрофобных остатка, в том числе один тирозиновый, один триптофановый и четыре фенилаланиновых.

Многие яды животных продемонстрировали способность воздействовать на систему гемостаза человека в качестве прокоагулянтов или антикоагулянтов (Brazón et al., 2009). В этом исследовании TanP смог увеличить время свертывания в тестах PT и aPTT в самых высоких концентрациях (рис. 5), демонстрируя антикоагулянтную активность.

Некоторые яды скорпиона вызывают нарушения свертываемости крови, но количество изученных коагулопатических соединений значительно меньше (Félix-Silva et al., 2014). Дипептиды, выделенные из яда скорпиона Heterometrus laoticus , не проявляли антикоагулянтной активности в концентрациях до 100 мкМ в тестах протромбинового времени и аЧТВ с плазмой человека, но они сильно увеличивали время кровотечения из хвоста мыши и образование сгустка in vitro за счет ингибирование агрегации тромбоцитов (Tran et al. , 2017).

Дискреплазминин, пептид, выделенный из яда Tityus discrepans , проявлял антифибринолитическую активность, поскольку ингибирует плазмин; хотя предыдущее исследование показало увеличение протромбинового времени и аЧТВ плазмы человека в присутствии яда (Brazón et al., 2009). Гидролизат белка BmK скорпиона ( B. martensii Karsch) проявлял высокую антикоагулянтную активность, и это действие было связано с наличием отрицательно заряженных аминокислот и гидрофобных остатков (Ren et al., 2014).

Кроме того, TanP не продемонстрировал способность гидролизовать фибриноген в протестированных концентрациях. В отличие от результатов, полученных в этом исследовании, у T. discrepans было установлено, что фибриногенолитические ферменты ответственны за деградацию цепей фибриногена Aα и Bβ, и эти механизмы также были связаны с пролонгацией TP и активированным аЧТВ, продуцируемым клетками. яд Т.disrepans (Brazón et al., 2014), демонстрируя, что компоненты, присутствующие в яде скорпиона, могут оказывать широкое разнообразие эффектов на гемостаз.

Наши результаты показывают, что наблюдаемая антикоагулянтная активность может быть связана с ингибирующим действием на факторы свертывания крови. Другая гипотеза наблюдаемого антикоагулянтного действия состоит в том, что возможной целью вмешательства пептидов может быть агрегация тромбоцитов, поскольку для пептидов, выделенных из скорпионов, этот механизм уже выяснен (Thien et al., 2017).

Хотя в литературе описаны и другие пептиды яда скорпиона с антикоагулянтной активностью, это первое исследование, демонстрирующее, что анионные пептиды, присутствующие в яде скорпиона, обладают такой активностью. Однако, учитывая представленные результаты, необходимы дальнейшие исследования для выяснения точного механизма антикоагулянтного действия TanP.

Яды и токсины ответственны за модулирование иммунного ответа (Петрикевич, 2002; Петриевич и Лебрен, 2005).Отравление различными видами скорпионов, даже рода Tityus , приводит к высвобождению про- и противовоспалительных цитокинов, а баланс между такими цитокинами при отравлении определяет степень и протяженность воспаления, что может привести к важным клиническим эффекты, такие как сердечная дисфункция, отек легких и шок (Петрикевич, 2010).

Макрофаги – это клетки, участвующие во всех стадиях воспалительного процесса, так как фагоцитоз способствует выработке хемокинов, цитокинов и факторов роста.Кроме того, макрофаги обладают обширной фенотипической и функциональной пластичностью, регуляция которых критически определяет благоприятные или неблагоприятные исходы воспалительных реакций (Mendes et al., 2019). TanP способствовал высвобождению TNF-α в мышиных макрофагах в отсутствие LPS (рис. 6A). Неизвестно, возникает ли стимуляция продукции цитокина TNF-α из-за неспецифического взаимодействия пептида с мембраной макрофага или из-за взаимодействия со специфическим рецептором. Однако маловероятно, что TanP связывается с рецептором ЛПС, так как действие ЛПС на продукцию цитокинов не изменяется в присутствии пептида.

Предыдущие исследования с ядом скорпиона (TSV) T. serrulatus показали, что инкубация макрофагов с TSV обеспечивала увеличение продукции IL-6 и IFN-γ, но не было обнаружено TNF-α в клетке супернатант (Петриевич, 2002). Однако при оценке активности фракций, выделенных из этого яда, было установлено, что фракция FII является мощным активатором продукции макрофагами TNF-α (Петрикевич, Лебрун, 2005).

Основные аминокислоты, присутствующие в пептидной цепи, являются важными остатками для взаимодействия с мишенью в макрофагах.Катионные пептиды, выделенные из яда T. serrulatus , были способны модулировать ответы макрофагов, увеличивая высвобождение IL-6 (Pucca et al., 2016). Было продемонстрировано, что ToAP3 и ToAP4, катионные пептиды, полученные из яда T. obscurus , являются потенциальными иммуномодуляторами in vitro на мышиных макрофагах, полученных из костного мозга, стимулированных LPS, способных снижать высвобождение TNF-α. Эта стимуляция связана с взаимодействием пептида с толл-подобным рецептором 4 (TLR4).Однако повышения уровней цитокинов не наблюдалось, когда обе клетки обрабатывали только ToAP3 или ToAP4 (Veloso Junior et al., 2019). Хотя TanP не имел в своем составе основных аминокислотных остатков и был богат кислотными и гидрофобными остатками, он был способен модулировать высвобождение цитокинов макрофагами в отсутствие ЛПС. В мышиных макрофагах ЛПС связывается с переносчиком ЛПС-связывающего белка (LBP). Комплекс LPS-LBP взаимодействует с некоторыми рецепторами, такими как белки CD14, MD2 и TLR-4, которые запускают активацию внутриклеточного каскада, индуцирующего активацию ядерного фактора транскрипции каппа B в ядре, отвечающего за транскрипцию. провоспалительных генов, что приводит к продукции воспалительных цитокинов и экспрессии костимулирующих молекул (Torres-Rêgo et al., 2016; Замятина, Гейне, 2020). Механизм, связанный с иммуномодулирующим эффектом TanP, до сих пор неясен, и для его выяснения необходимо провести дополнительные тесты. Однако возможно, что TanP взаимодействует с TLR4, индуцируя продукцию TNF-α. Это взаимодействие значительно меньше, чем способность рецептора распознавать ЛПС, поэтому присутствие пептида не препятствует активации, вызванной ЛПС.

Высвобождение нитрита макрофагами RAW в присутствии ЛПС ингибировалось TanP, что указывает на то, что пептид нейтрализует выработку оксида азота, индуцированную ЛПС. Обработка TanP без стимуляции ЛПС достигла того же уровня, что и отрицательный контроль (Melo et al., 2017). Таким образом, предполагается, что TanP обладает иммуномодулирующим потенциалом, поскольку в нестимулированных макрофагах он может увеличивать высвобождение медиаторов воспаления, а в присутствии LPS снижает выработку оксида азота, тем самым предотвращая обострение воспалительных реакций. Есть несколько исследований, посвященных иммуномодулирующему потенциалу анионных пептидов. На сегодняшний день неизвестны исследования с анионным пептидом из яда скорпиона в отношении иммуномодулирующей активности.

При поражении кожи заживление раны после гемостаза происходит в три перекрывающихся этапа: воспаление, пролиферация и ремоделирование. Фибробласты имеют решающее значение во всех трех фазах (Desjardins-Park et al., 2018). Миграция фибробластов может ускорить процесс ревитализации раны и способствовать ее закрытию в процессе заживления (Liu et al., 2014; Yang et al., 2019).

В этом исследовании было продемонстрировано, что TanP (2–50 мкМ) не обладает способностью стимулировать пролиферацию клеток 3T3 in vitro , но значительное увеличение процента закрытия поражений наблюдалось через 24 часа инкубация с пептидом в определенных концентрациях за счет действия на миграцию фибробластов (рис. 7).Таким образом, предполагается, что TanP может действовать как экзогенный фактор роста фибробластов или может усиливать активность существующих факторов роста фибробластов.

Хронические раны содержат высокие уровни активных форм кислорода и азота. Перепроизводство свободных радикалов вместе с накоплением ионов железа увековечивает воспалительную фазу, что приводит к тяжелому повреждению тканей. По этой причине введение антиоксидантов кажется многообещающей стратегией, способствующей нормальному заживлению ран (Pivec et al., 2019).

Молекулы, хелатирующие железо, такие как дефероксамин, обладают высоким потенциалом заживления ран даже при работе с пациентами с диабетом, что позволяет предположить, что истощение запасов железа полезно при эндотелиальной дисфункции при диабете (Duscher et al., 2018). Таким образом, поскольку TanP способен хелатировать ионы железа, есть вероятность, что эта функция может способствовать процессу заживления ран.

В процессе воспаления на начальном этапе заживления в месте раны высвобождается избыточное количество медиаторов воспаления, таких как радикалы, что часто связано с окислительным стрессом и последующим длительным воспалением, что приводит к затруднению заживления раны (Zhao et al. , 2019). Следовательно, поскольку TanP также продемонстрировал значительные результаты в отношении хелатирующих и антиоксидантных свойств, а также противовоспалительной способности, этот пептид обладает высоким потенциалом для применения в качестве прототипа для получения новых заживляющих средств.

Это первое исследование, посвященное роли анионных пептидов скорпионов в иммуномодуляции и процессе заживления ран. Кроме того, TanP продемонстрировал способность хелатировать ионы Fe 2+ и показал антиоксидантный и антикоагулянтный потенциал.Этот подход дает предварительные результаты относительно терапевтического потенциала TanP, которые служат основой для разработки новых исследований в поисках прототипа нового препарата. Кроме того, TanP имеет потенциал для биотехнологического применения и может быть использован в качестве биосенсора для идентификации и количественного определения ионов Fe 2+ .

Заявление о доступности данных

Наборы данных, представленные в этом исследовании, можно найти в онлайн-репозиториях. Названия репозитория/репозиториев и инвентарные номера можно найти в статье/дополнительных материалах.

Вклад авторов

ММ отвечал за концептуализацию, методологию, формальный анализ, исследование, написание исходного проекта и визуализацию. VO провел методологию, формальный анализ и написание — обзор и редактирование. MQ выполнил методологию, формальный анализ и написание — обзор и редактирование. WP выполнил методологию, формальный анализ и написание — обзор и редактирование. MT-R отвечал за написание, обзор и редактирование. SRBS выполнила методологию, формальный анализ и написание — обзор и редактирование.DP провел формальный анализ и написание — обзор и редактирование. HR реализовал формальный анализ и написание — просмотр и редактирование. М.С. отвечал за методологию, формальный анализ и написание — обзор и редактирование. AS-J отвечал за ресурсы и написание — обзор и редактирование. MF-P отвечал за концептуализацию, методологию, написание, обзор и редактирование, надзор, управление проектом и финансирование. Все авторы в равной степени внесли свой вклад в разработку рукописи и одобрили окончательную версию.

Финансирование

Это исследование частично финансировалось Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior — Brasil (CAPES) — Финансовый кодекс 001 и CAPES — Toxinology 063/2010.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Примечание издателя

Все претензии, изложенные в этой статье, принадлежат исключительно авторам и не обязательно представляют претензии их дочерних организаций, издателя, редакторов и рецензентов.Любой продукт, который может быть оценен в этой статье, или претензии, которые могут быть сделаны его производителем, не гарантируются и не поддерживаются издателем.

Благодарности

Авторы выражают благодарность Национальному совету научных исследований и технологий (CNPq). Авторы благодарят Центр высокопроизводительных вычислений УФРН (NPAD/UFRN) за компьютерный кластер. Авторы благодарят кафедру биохимии УФРН за предоставленную нам возможность использовать помещения клеточной культуральной комнаты.Авторы также благодарны Glenn Hawes, M Ed. (Магистр английского образования, Университет Джорджии) за редактирование рукописи.

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmolb.2021.785316/full#supplementary-material

Ссылки

Adams, PD, Chen, Y., Ma, K., Zagorski, MG, Sönnichsen, FD, McLaughlin, ML, et al. (2002). Внутримолекулярное тушение флуоресценции триптофана пептидной связью в циклических гексапептидах. Дж. Ам. хим. соц. 124, 9278–9286. doi:10.1021/ja0167710

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Алмаайтах А., Тарази С., Мхайдат Н., Аль-Балас К. и Мукатташ Т. Л. (2013). Маурипорин, новый катионный α-спиральный пептид с селективной цитотоксической активностью в отношении клеточных линий рака предстательной железы из яда скорпиона Androctonus Mauritanicus. Междунар. Дж. Пепт. Рез. тер. 19, 281–293. doi:10.1007/s10989-013-9350-3

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Алмейда, Д.Д., Скортеччи, К.С., Кобаши, Л.С., Агнез-Лима, Л.Ф., Медейрос, С.Р.Б., Сильва-Джуниор, А.А., и соавт. (2012). Профилирование покоящейся ядовитой железы скорпиона Титиуса Стигмуруса с помощью транскриптомного исследования. BMC Genomics 13, 362. doi:10.1186/1471-2164-13-362

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Альваренга, Э. Р., Мендес, Т. М., Магальяеш, Б. Ф., Сикейра, Ф. Ф., Дантас, А. Э., Баррока, Т. М., и др. (2012). Транскриптомный анализ ядовитой железы скорпиона Tityus Serrulatus. OJGen 02, 210–220. doi:10.4236/ojgen.2012.24027

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Антониадес В., Сиога А., Дитрих Э. М., Медицкоу С., Эконому Л. и Антониадес К. (2013). Является ли хелатирование меди эффективной антиангиогенной стратегией лечения рака? Мед. Гипотезы 81, 1159–1163. doi:10.1016/j.mehy.2013.09.035

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Антониетти В., Будесок С., Дюпон Л., Farvacques, N., Cézard, C., Da Nascimento, S., et al. (2017). Синтез, свойства комплексообразования железа (III), моделирование молекулярной динамики и сидерофороподобная активность P. aeruginosa двух аналогов пиовердина. евро. Дж. Мед. хим. 137, 338–350. doi:10.1016/j.ejmech.2017.06.010

CrossRef Full Text | Google Scholar

Бал В., Соколовска М., Куровска Э. и Фаллер П. (2013). Связывание ионов переходных металлов с альбумином: сайты, сродство и скорость. Биохим. Биофиз. Acta (Bba) — Общие предметы 1830, 5444–5455. doi:10.1016/j.bbagen.2013.06.018

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Балекар Н., Каткам Н. Г., Накфенг Т., Джехтае К. и Шричана Т. (2012). Оценка потенциала заживления ран листьев Wedelia Trilobata (L.). J. Этнофармакол. 141, 817–824. doi:10.1016/j.jep.2012.03.019

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Bannwarth, C., Caldeweyher, E., Ehlert, S., Hansen, A., Pracht, P., Seibert, J., et al. (2021). Расширенные методы квантовой химии с сильной связью. Провода Расчет. Мол. науч. 11, 1–49. doi:10.1002/wcms.1493

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Барадаран М., Джалали А., Надери-Соорки М., Джокар М. и Галехдари Х. (2018). Первый транскриптомный анализ иранского скорпиона, Mesobuthus Eupeus Venom Gland. Иран. Дж. Фарм. Рез. 17, 1488–1502. doi:10.22037/ijpr.2018.2300

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Бекхит, С.HM, Awadalla, EA, Salman, MM, and Hassan, MK (2013). Профилактика гепато- и почечной токсичности с помощью брадикинин-потенцирующего фактора (BPF), выделенного из яда египетского скорпиона ( Buthus Occitanus ) у крыс, получавших гентамицин. Ткани и клетки 45, 89–94. doi:10.1016/j.tice.2012.09.006

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Бен-Шушан С. и Миллер Ю. (2021). Нейропептиды: роль и активность в качестве хелаторов металлов при нейродегенеративных заболеваниях. J. Phys. хим. В 125, 2796–2811. doi:10.1021/acs.jpcb.0c11151

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Бразон, Дж., Д’Сюз, Г., Д’Эррико, М.Л., Ароча-Пиньянго, К.Л., и Герреро, Б. (2009). Дискреплазминин, ингибитор плазмина, выделенный из яда скорпиона Tityus Discrepans . Арх. Токсикол. 83, 669–678. doi:10.1007/s00204-008-0377-8

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Бразон, Дж., Герреро, Б., Д’Сьюз, Г., Севчик, К., и Ароча-Пиньянго, К.Л. (2014). Фибрин(оген)олитические ферменты в яде скорпиона ( Tityus Discrepans ). Комп. Биохим. Физиол. Б: Биохим. Мол. биол. 168, 62–69. doi:10.1016/j.cbpb.2013.11.007

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Каэтано-Сильва, М. Э., Рунд, Л. А., Вайлати-Рибони, М., Пачеко, М. Т. Б., и Джонсон, Р. В. (2021). Медь-связывающие пептиды ослабляют воспаление микроглии за счет подавления пути NF-kB. Мол. Нутр. Еда Рез. 65, 2100153–2100232. doi:10.1002/mnfr.202100153

CrossRef Full Text | Google Scholar

Каэтано-Сильва, М. Э., Алвес, Р. К., Лусена, Г. Н., Фрем, Р. К. Г., Бертольдо-Пачеко, М. Т., Лима-Паллоне, Дж. А., и др. (2017). Синтез комплексов сывороточный пептид-железо: влияние использования различных соединений-предшественников железа. Пищевой Рез. Междунар. 101, 73–81. doi:10.1016/j.foodres.2017.08.056

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Каэтано-Сильва, М.Э., Силла А., Бертольдо-Пачеко М.Т., Нетто Ф.М. и Алегриа А. (2018). Оценка биодоступности железа In Vitro в свободной форме и в виде комплексов сывороточный пептид-железо. J. Пищевой компост. Анальный. 68, 95–100. doi:10.1016/j.jfca.2017.03.010

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Карраско-Кастилья, Дж. , Эрнандес-Альварес, А. Дж., Хименес-Мартинес, К., Хасинто-Эрнандес, К., Алайс, М., Хирон-Калле, Дж., и др. (2012). Антиоксидантная и металлохелатирующая активность пептидных фракций фазеолина и гидролизатов белков фасоли. Пищевая хим. 135, 1789–1795. doi:10.1016/j.foodchem.2012.06.016

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Сеса-Луна, К., Муньос-Рохас, Дж., Сааб-Ринкон, Г., Баез, А., Моралес-Гарсия, Ю. Э., Хуарес-Гонсалес, В. Р., и др. (2019). Структурная характеристика пептидов Scorpion и их бактерицидная активность в отношении клинических изолятов бактерий с множественной лекарственной устойчивостью. PLoS One 14, e0222438. doi:10.1371/journal.pone.0222438

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Крони Дж.(2001). Флуоресцентная спектроскопия в биохимии: обучение основным принципам с визуальными демонстрациями. Биохим. Мол. биол. Образовательный 29, 60–65. doi:10.1016/S1470-8175(01)00019-4

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Д’Сьюз Г. , Росалес А., Салазар В. и Севчик К. (2010). Апоптогенные пептиды из яда скорпиона Tityus Discrepans , действующие против клеточной линии рака молочной железы SKBR3. Токсикон 56, 1497–1505. doi:10.1016/j.toxicon.2010.09.008

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Даниэле-Сильва, А., Мачадо, Р. Х. А., Монтейро, Н. К. В., Эстрела, А. Б., Сантос, Э. К. Г., Карвалью, Э., и др. (2016). Стигмурин и ЦАП-2 из яда скорпиона Tityus Stigmurus : оценка структуры и терапевтического потенциала при экспериментальном сепсисе. Токсикон 121, 10–21. doi:10.1016/j.toxicon.2016.08.016

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Даниэле-Сильва, А., Родригес, С. д. К.С., душ Сантос, Э.К.Г., Кейруш Нето, М.Ф.д., Роча, Х.А.д. O., Silva-Junior, A.A.d., et al. (2021). ЯМР-трехмерная структура катионного пептида стигмурина из яда скорпиона Tityus Stigmurus : In Vitro антиоксидант и In Vivo антибактериальная и заживляющая активность. Peptides 137, 170478. doi:10.1016/j.peptides.2020.170478

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

де Менезес, Ю.А., Феликс-Сильва, Дж., да Силва-Жуниор, А., Ребекки, И., де Оливейра, А., Учоа, А., и др. (2014). Богатая белком фракция листьев Cnidoscolus Urens (L.) arthur: ферментативная характеристика, прокоагулянтная и фибриногенолитическая активность. Молекулы 19, 3552–3569. doi:10.3390/molecules152

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

де Оливейра, У. К., Кандидо, Д. М., Коронадо Дорче, В. А., и Жункейра-де-Азеведу, И. д. Л. М. (2015).Рецепт транскриптома ядовитого коктейля Tityus Bahiensis Scorpion. Токсикон 95, 52–61. doi:10.1016/j.toxicon.2014.12.013

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

де Оливейра, У. К., Нишияма, М. Ю., Дос Сантос, М. Б. В., Сантос-Да-Сильва, А. д. П., Халкидис, Х. д. М., Соуза-Имберг А. и др. (2018). Подтвержденные протеомом транскриптомные профили ядовитых желез Tityus Obscurus и T. Serrulatus Scorpions. PLoS One 13, e0193739–23. doi:10.1371/journal.pone.0193739

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Ди Белла, Л. М., Алампи, Р., Бьюндо, Ф., Тоскано, Г., и Феличе, М. Р. (2017). Влияние хелатирования меди и провоспалительных цитокинов интерлейкина-6 на экспрессию различных белков, участвующих в метаболизме железа, в клеточной линии HepG2. БМС Биохим. 18, 1–11. doi:10.1186/s12858-017-0076-2

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Душер, Д., Januszyk, M., Maan, Z.N., Whittam, A.J., Hu, M.S., Walmsley, G.G., et al. (2018). Сравнение ингибитора гидроксилазы DMOG и хелатора железа дефероксамина при заживлении ран у диабетиков и пожилых людей. Общедоступный доступ HHS 139, 1–18. doi:10.1097/PRS.0000000000003072. Comparison

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Félix-Silva, J., Souza, T., Camara, R.B.B.G., Cabral, B., Silva-Junior, A.A., Rebecchi, I.M.M., et al. (2014). In Vitro антикоагулянтная и антиоксидантная активность Jatropha Gossypiifolia L.(Euphorbiaceae) Листья для терапевтического применения. BMC Дополнение. Альтерн. Медальтерн. Мед. 14, 1–13. doi:10.1186/1472-6882-14-405

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Frisch, M. J., Trucks, G. W., Schlegel, H. B., Scuseria, G. E., Robb, M. A., Cheeseman, J. R., et al. (2016). Гауссиан 16, редакция C.01 . Wallingford CT: Gaussian, Inc. doi:10.1016/j.jinorgbio.2012.04.008

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фуртадо, А.А., Даниэле-Сильва, А., Сильва-Джуниор, А.А.д., Фернандес-Педроса, М.д. Ф., Марко М., Дейу Т. и соавт. (2020). Биология, состав яда и скорпионизм, вызванный бразильским скорпионом Tityus Stigmurus (Thorell, 1876) (Scorpiones: Buthidae): мини-обзор. Токсикон 185, 36–45. doi:10.1016/j.toxicon.2020.06.015

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Гао Б., Сюй Дж., дель Кармен Родригес М., Ланц-Мендоса Х., Эрнандес-Ривас Р., Du, W., et al. (2010). Характеристика двух линейных катионных противомалярийных пептидов у Scorpion Mesobuthus Eupeus . Биохимия 92, 350–359. doi:10.1016/j.biochi.2010.01.011

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Гримме, С. (2019). Исследование химического соединения, конформера и реакционного пространства с помощью моделирования метадинамики на основе квантово-химических расчетов с жесткой связью. J. Chem. Теор. вычисл. 15, 2847–2862.doi:10.1021/acs.jctc.9b00143

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Guilhelmelli, F., Vilela, N., Smidt, K.S., de Oliveira, M.A., da Cunha Morales Álvares, A., Rigonatto, M.C.L., et al. (2016). Активность противогрибковых пептидов, полученных из яда скорпиона, против планктонных клеток Candida Spp. и Cryptococcus Neoformans и Candida Albicans Биопленки. Перед. микробиол. 7, 1–14. doi: 10.3389/fmicb.2016.01844

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Guo, X., Ma, C., Du, Q., Wei, R., Wang, L., Zhou, M., et al. (2013). Два пептида, ЦАП-1 и ЦАП-2, из яда бразильского желтого скорпиона, Tityus Serrulatus : оценка их антимикробной и противораковой активности. Биохимия 95, 1784–1794. doi:10.1016/j.biochi.2013.06.003

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Лай Р., Лю Х., Хуэй Ли В.и Чжан Ю. (2002). Анионный противомикробный пептид из жабы Bombina Maxima . Биохим. Биофиз. Рез. коммун. 295, 796–799. doi:10.1016/S0006-291X(02)00762-3

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Лейтч Х.А. и Гаттерманн Н. (2019). Гематологическое улучшение с помощью терапии хелатированием железа при миелодиспластических синдромах: клинические данные, потенциальные механизмы и нерешенные вопросы. Крит. Преподобный Онкол./Гематол. 141, 54–72.doi:10.1016/j.critrevonc.2019.06.002

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Лю Х., Му Л., Тан Дж., Шен К., Гао К., Ронг М. и др. (2014). Потенциальный пептид, способствующий заживлению ран из кожи лягушки. Междунар. Дж. Биохим. Цель биол. 49, 32–41. doi:10.1016/j.biocel.2014.01.010

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Lv, Y., Liu, Q., Bao, X., Tang, W., Yang, B. и Guo, S. (2009). Идентификация и характеристики железохелатирующих пептидов из гидролизатов соевого белка с использованием IMAC-Fe 3+ . Дж. Агрик. Пищевая хим. 57, 4593–4597. doi:10.1021/jf

04

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Мачадо Р. Дж. А., Эстрела А. Б., Насименто А. К. Л., Мело М. М. А., Торрес-Рего М., Лима Э. О. и др. (2016). Характеристика TistH, многофункционального пептида скорпиона Tityus Stigmurus : структура, цитотоксичность и антимикробная активность. Токсикон 119, 362–370. doi:10.1016/j.toxicon.2016.06.002

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Мело, М.М.А., Даниэле-Сильва, А., Тейшейра, Д.Г., Эстрела, А.Б., Мело, К.Р.Т., Оливейра, В.С., и соавт. (2017). Структура и активность In Vitro медь-II-хелатирующего анионного пептида из яда скорпиона Tityus Stigmurus . Пептиды 94, 91–98. doi:10.1016/j.peptides.2017.05.009

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Мело-Сильвейра Р.Ф., Фиделис Г.П., Коста М.С.С.П., Теллес С.Б.С., Дантас-Сантос Н., Элиас, С.д. О. и др. (2012). Антиоксидант In Vitro , антикоагулянтная и противомикробная активность и ингибирование пролиферации раковых клеток ксиланом, экстрагированным из кукурузных початков. Междунар. Дж. Мол. науч. 13, 409–426. doi:10.3390/ijms13010409

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Мело-Сильвейра Р., Фиделис Г., Виана Р., Соэйро В., Силва Р., Мачадо Д. и др. (2014). Антиоксидантная и антипролиферативная активность метанольного экстракта из забытого сельскохозяйственного продукта: кукурузных початков. Молекулы 19, 5360–5378. doi:10.3390/molecules160

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Мендес Л. Ф., Гаспар В. М., Конде Т. А., Мано Дж. Ф. и Дуарте И. Ф. (2019). Опосредованная флавоноидами иммуномодуляция макрофагов человека включает ключевые метаболиты и метаболические пути. науч. Респ. 9, 1–10. doi:10.1038/s41598-019-51113-z

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Мосманн, Т. (1983).Быстрый колориметрический анализ клеточного роста и выживания: применение к анализам пролиферации и цитотоксичности. Дж. Иммунол. Методы 65, 55–63. doi:10.1016/0022-1759(83)-4

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Nascimento, A.K.L., Melo-Silveira, R.F., Dantas-Santos, N., Fernandes, J.M., Zucolotto, S. M., Rocha, H.A.O., et al. (2013). Антиоксидантная и антипролиферативная активность экстрактов листьев Plukenetia volubilis Linneo (Euphorbiaceae). Дополнение, основанное на доказательствах. Альтерн. Мед. 2013, 950272. doi:10.1155/2013/950272

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Не, Ю., Цзэн, X.-C., Ян, Ю., Луо, Ф., Луо, X., Ву, С., и др. (2012). Новый класс антимикробных пептидов скорпиона Heterometrus Spinifer . Пептиды 38, 389–394. doi:10.1016/j.peptides.2012.09.012

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Ортис Э., Гурола Г.Б., Шварц, Э. Ф., и Поссани, Л. Д. (2015). Компоненты яда скорпиона как потенциальные кандидаты для разработки лекарств. Токсикон 93, 125–135. doi:10.1016/j.toxicon.2014.11.233

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Perdew, JP (1986). Приближение функционала плотности для корреляционной энергии неоднородного электронного газа. Физ. Ред. B 33, 8822–8824. doi:10.1103/PhysRevB.33.8822

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Петриевич В.Л. и Лебрен И. (2005). Иммуномодулирующие эффекты яда Tityus Serrulatus на функции мышиных макрофагов In Vitro . Медиаторы воспаления. 2005, 39–49. doi:10.1155/MI.2005.39

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Петриевич В. Л. (2010). Яд скорпиона и воспалительная реакция. Медиаторы воспаления. 2010, 1–16. doi:10.1155/2010/5

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Пивек Т., Каргл Р., Мавер У., Брачич М., Эльшнер Т., Жагар Э. и др. (2019). Взаимосвязь химической структуры и антиоксидантной активности ферментативно полимеризованного рутина на водной основе и его ранозаживляющий потенциал. Полимеры (Базель) 11, 1–21. doi:10.3390/polym11101566

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Прахт П. , Боле Ф. и Гримме С. (2020). Автоматизированное исследование низкоэнергетического химического пространства быстрыми квантово-химическими методами. Физ.хим. хим. физ. 22, 7169–7192. doi:10.1039/C9CP06869D

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Преса Ф., Маркес М., Виана Р., Нобре Л., Коста Л. и Роча Х. (2018). Защитная роль сульфатированных полисахаридов из зеленых водорослей Udotea Flabellum в клетках, подвергающихся окислительному повреждению. Mar. Drugs 16, 135. doi:10.3390/md16040135

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Преториус, Э., Бестер Дж., Вермеулен Н., Липински Б., Герике Г.С. и Келл Д.Б. (2014). Глубокие морфологические изменения эритроцитов и фибриновых сетей у больных гемохроматозом или гиперферритинемией и их нормализация хелаторами железа и другими агентами. PLoS One 9, e85271. doi:10.1371/journal.pone.0085271

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Пукка М. Б., Черни Ф. А., Пинейро-Джуниор Э. Л., Зоккал К. Ф., Бордон К. Д.C.F., Amorim, F.G., et al. (2016). Пептиды без дисульфидного мостика из яда Tityus Serrulatus : доказательства существования ингибиторов АПФ без пролина. Пептиды 82, 44–51. doi:10.1016/j.peptides.2016.05.008

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Рид А. Э. и Вейнхольд Ф. (1983). Орбитальный анализ естественной связи водного димера, близкого к Хартри-Фоку. J. Chem. физ. 78, 4066–4073. doi:10.1063/1.445134

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Рен Ю., Ву Х., Лай Ф., Ян М., Ли Х. и Тан Ю. (2014). Выделение и идентификация нового антикоагулянтного пептида из ферментативных гидролизатов белка скорпиона ( Buthus Martensii Karsch). Пищевой рез. Междунар. 64, 931–938. doi:10.1016/j.foodres.2014.08.031

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Sales, T.A., Prandi, I.G., Castro, A. A., Leal, DHS, Cunha, EFFFD, Kuca, K., et al. (2019). Последние разработки в области препаратов на основе металлов и хелатирующих агентов для лечения нейродегенеративных заболеваний. Int J. Mol. науч. 20, 1829. doi:10.3390/ijms20081829

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Скальмани Г. и Фриш М. Дж. (2010). Модели сольватации с поляризуемым континуумом с непрерывным поверхностным зарядом. I. Общий формализм. J. Chem. физ. 132, 114110. doi:10.1063/1.3359469

CrossRef Full Text | Google Scholar

Сегура-Рамирес, П., и Сильва Джуниор, П. (2018). Loxosceles Gaucho Яд паука: неиспользованный источник антимикробных агентов. Toxins 10, 522. doi:10.3390/toxins10120522

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ши, В., Хе, П., Цзэн, X.-C., Ву, В. и Чен, X. (2018). Ингибирующее действие кислого пептида на активность антимикробного пептида скорпиона Mesobuthus Martensii Karsch. Molecules 23, 3314. doi:10.3390/molecules23123314

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Сильва, Ф. Д., Резенде, К. А., Росси, Д.C.P., Esteves, E., Dyszy, F.H., Schreier, S., et al. (2009). Структура и механизм действия микроплюсина, антимикробного пептида, хелатирующего медь II, из клеща крупного рогатого скота Rhipicephalus (Boophilus) Microplus . J. Biol. хим. 284, 34735–34746. doi:10.1074/jbc.M109.016410

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Сингх, С., и Сингх, Р. П. (2008). In Vitro Методы анализа антиоксидантов: обзор. Food Rev. Int. 24, 392–415.doi:10.1080/8755

02304269

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Smith, SW (2013). Роль хелатирования в лечении отравлений другими металлами. J. Med. Токсикол. 9, 355–369. doi:10.1007/s13181-013-0343-6

CrossRef Full Text | Google Scholar

Тьен Т. В., Ань Х. Н., Транг Н. Т. Т., Трунг П. В., Хоа Н. К., Осипов А. В. и др. (2017). Низкомолекулярные соединения с антикоагулянтной активностью из скорпиона Heterometrus Laoticus Venom. Докл. Биохим. Биофиз. 476, 316–319. doi:10.1134/S1607672917050052

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Тонин Т. Д., Тисен Л. К., де Оливейра Нуньес М. Л., Броринг М. Ф., Донато М. П., Госс М. Дж. и др. (2016). Экстракт Rubus Imperialis (Rosaceae) и чистое соединение Нига-Ичигозид F1: ранозаживляющее и противовоспалительное действие. Арка Наунина-Шмидеберга. Фармакол. 389, 1235–1244. doi:10.1007/s00210-016-1285-8

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Торрес-Рего, М., Furtado, A.A., Bitencourt, M.A.O., Lima, M.C.J. d. S., Andrade, R.C.L.C.d., Azevedo, E.P.d., et al. (2016). Противовоспалительная активность водного экстракта и биоактивных соединений, идентифицированных из плодов Hancornia Speciosa Gomes (Apocynaceae). BMC Дополнение. Альтерн. Мед. 16, 1–10. doi:10.1186/s12906-016-1259-x

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Торрес-Рего, М., Глаусиа-Сильва, Ф., Роша Соареш, К. С., де Соуза, Л.B.F.C., Damasceno, I.Z., Santos-Silva, E.d., et al. (2019). Биоразлагаемые сшитые наночастицы хитозана улучшают анти- Candida и антибиопленочную активность TistH, пептида, идентифицированного в ядовитой железе скорпиона Tityus Stigmurus . Матер. науч. англ. C 103, 109830. doi:10.1016/j.msec.2019.109830

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тран Т., Хоанг А., Нгуен Т., Фунг Т., Нгуен К., Осипов А. и др. (2017). Антикоагулянтная активность низкомолекулярных соединений из Heterometrus Laoticus Scorpion Venom. Toxins 9, 343. doi:10.3390/toxins43

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Вальдес-Веласкес Л.Л., Кинтеро-Эрнандес В., Ромеро-Гутьеррес М. Т., Коронас Ф.И.В. и Поссани Л.Д. (2013). Массовое дактилоскопирование яда и транскриптом ядовитой железы скорпиона Centruroides Tecomanus . PLoS One 8, e66486. doi:10.1371/journal.pone.0066486

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Вальдес-Веласкес, Л.Л., Сид-Урибе, Дж., Ромеро-Гутьеррес, М.Т., Оламенди-Португал, Т., Хименес-Варгас, Дж.М., и Поссани, Л.Д. (2020). Транскриптомный и протеомный анализ яда и ядовитых желез Centruroides Hirsutipalpus , опасного скорпиона из Мексики. Токсикон 179, 21–32. doi:10.1016/j.toxicon.2020.02.021

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Veloso Júnior, P. H. d. Х., Саймон, К.С., де Кастро, Р.Х.А., Коэльо, Л.К., Эразо, Ф.А.H., de Souza, A.C.B., et al. (2019). Пептиды ToAP3 и ToAP4 снижают высвобождение воспалительных цитокинов посредством блокирования TLR-4. Биомед. Фармацевт. 118, 109152. doi:10.1016/j.biopha. 2019.109152

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Вали А., Вубуликасиму А., Яньхуа Г., Омар А., Аркен А., Йили А. и др. (2020). Выделение и очистка антиоксидантных пептидов из ферментативно приготовленных белковых гидролизатов скорпиона ( Buthus Martensii Karsch). Междунар. Дж. Пепт. Рез. тер. 26, 1803–1818 гг. doi:10.1007/s10989-019-09976-3

CrossRef Full Text | Google Scholar

Ван Дж., Чжан К., Чжан З. и Ли З. (2008). Антиоксидантная активность сульфатированных полисахаридных фракций, экстрагированных из Laminaria Japonica . Междунар. Дж. Биол. макромол. 42, 127–132. doi:10.1016/j.ijbiomac.2007.10.003

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Вейгенд Ф. и Альрихс Р. (2005). Сбалансированные базовые наборы расщепленной валентности, тройной дзета-валентности и четырехкратной дзета-валентности для качества от H до Rn: проектирование и оценка точности. Физ. хим. хим. физ. 7, 3297–3305. doi:10.1039/b508541a

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Ву, В., Ли, Б., Хоу, Х., Чжан, Х. и Чжао, X. (2017). Идентификация железохелатирующих пептидов из желатина кожи тихоокеанской трески и возможный способ связывания. J. Функц. Продукты питания 35, 418–427. doi:10.1016/j.jff.2017.06.013

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Янаи Т., Тью Д. П. и Хэнди Н. К. (2004). Новый гибридный обменно-корреляционный функционал с использованием метода кулоновского затухания (CAM-B3LYP). Хим. физ. лат. 393, 51–57. doi:10.1016/j.cplett.2004.06.011

Полный текст CrossRef | Google Scholar

Ян Ф., Джин С. и Тан Ю. (2019). Пептиды морского коллагена способствуют пролиферации клеток фибробластов NIH-3T3 через сигнальный путь NF-κB. Molecules 24, 4201. doi:10.3390/molecules24224201

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Ю. Ю., Гутьеррес Э., Ковачевич З., Салетта Ф., Обейди П., Сурио Рахманто Ю., и другие. (2012). Хелаторы железа для лечения рака. CMC 19, 2689–2702. doi:10.2174/092986712800609706

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Замятина А. и Хайне Х. (2020). Распознавание липополисахарида на пересечении путей воспаления, опосредованных TLR4 и каспазой-4/11. Перед. Иммунол. 11, 1–22. doi:10.3389/fimmu.2020.585146

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Цзэн, X.-C., Wang, S., Nie, Y., Zhang, L., and Luo, X. (2012). Характеристика BmKbpp, многофункционального пептида китайского скорпиона Mesobuthus Martensii Karsch: понимание нового механизма функциональной диверсификации пептидов яда скорпиона. Пептиды 33, 44–51. doi:10.1016/j.peptides.2011.11.012

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Цзэн X., Ан Х., Ю Ф., Ван К., Чжэн Л. , Чжоу В. и др. (2021). Преимущества хелаторов железа при лечении болезни Паркинсона. Нейрохим. Рез. 46, 1239–1251. doi:10.1007/s11064-021-03262-9

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Zhang, X., Jia, Q., Li, M., Liu, H., Wang, Q., Wu, Y., et al. (2021). Выделение нового кальцийсвязывающего пептида из гидролизатов фосфвитина и изучение механизма его хелатирования кальция. Пищевой Рез. Междунар. 141, 110169. doi:10.1016/j.foodres.2021.110169

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Чжао Ю., Dai, C., Wang, Z., Chen, W., Liu, J., Zhuo, R., et al. (2019). Новая композитная повязка, содержащая куркумин, способствует заживлению ран благодаря своему естественному антиоксидантному эффекту. Наркотики Des. Девель Тер. 13, 3269–3280. doi:10.2147/DDDT.S219224

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Жданова Н. Г., Ширшин Е. А., Максимов Е. Г., Панчишин И. М., Салецкий А. М., Фадеев В. В. (2015). Тирозиновое флуоресцентное исследование конформационных изменений альбумина, вызванных поверхностно-активным веществом. Фотохим. Фотобиол. науч. 14, 897–908. doi:10.1039/x0xx00000x10.1039/c4pp00432a

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

СТРАНИЦА НЕ НАЙДЕНА — РАДИ ПОТОМКОВ

Для потомков Саке

Королевский Исторический проект ВМС Канады

 

 

Добро пожаловать ради потомков — сайт, посвященный сохранению и обмену история служивших в РКН и кораблей на которых они служили в.

 

 

Вы попали на эту страницу по устаревшей ссылке. То страница, которую вы ищете, была перемещена или удалена.

 

 

Пожалуйста, вернитесь к Домашняя страница и обновите закладки

 

 

http://www.forposterityssake.ca/RCN.htm

 

 

Мы извините за неудобства

 

 

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка браузера на прием файлов cookie

Существует множество причин, по которым файл cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее распространенные причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы принять файлы cookie, или спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файл cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Попробуйте другой браузер, если вы подозреваете это.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы это исправить, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Предоставить доступ без файлов cookie потребует от сайта создания нового сеанса для каждой посещаемой вами страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в файле cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только та информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, если вы не решите ввести его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступ к остальной части вашего компьютера, и только сайт, создавший файл cookie, может его прочитать.

Минай — Львов. Прогноз и анонс на матч — Украинская Премьер-лига — 26.09.2021 — Арогед

В первом воскресном матче 9-го тура «Минай» в Ужгороде встретится со «Львовом», которому ранее проиграли в обоих матчах Премьер-лиги.В случае победы на этот раз львовяне могут догнать закарпатцев в турнирной таблице.

Пропуск

К новому противостоянию со Львовом подопечные Василия Кобина подошли с длинной серией поражений в чемпионате, которая длится 6 игр: три ничьи и три поражения. До повторения антирекорда клуба остался всего один матч. «Минаж» не смогла почувствовать вкус победы в недавнем кубковом матче с представителем Первой лиги «Альянсом», уступив со счетом 2:3. В кубковой игре, кстати, ворота Минаи защищал Герман Пеньков, который в нынешнем чемпионате пока не задействован.

При этом с начала нынешнего сезона «Минаж» дома еще не ощутил горечь поражения в трех матчах: победа и две ничьи. Поэтому закарпатцы в воскресенье постараются продолжить домашнюю беспроигрышную серию, пытаясь отобрать первые очки в УПЛ у львовян. Не поможет Минаж в этой игре Евгений Селезнев, дисквалифицированный КДК УАФ на две игры за безликий жест, продемонстрированный болельщикам в матче с «Ворсклой».

Львов

«Горожане» находятся в нижней части турнирной таблицы, что не может не отражаться на психологическом состоянии игроков команды. Львов не выигрывал Премьер-лигу с 6 мая уже 10 игр подряд: четыре ничьи и шесть поражений. Кроме того, львовяне не забивали голов 346 минут. Неудивительно, что львовяне до сих пор остаются наименее результативной командой текущего чемпионата – всего 4 забитых мяча.

Тем не менее, после «сухой» ничьей в последнем туре с «Металлистом» 1925 года белорусский тренер львовян Олег Дулуб был настроен оптимистично, отметив: «Если мы не промахнулись, значит, движемся в правильном направлении.«Львовянам» удалось сохранить свои ворота «запертыми» в недавнем выездном кубковом матче, обыграв команду Первой лиги «Горняк-Спорт» (2:0). Посмотрим, как будет в игре с Минаем.

История встреч

Ранее футбольные пути соперников дважды пересекались в УПЛ, и оба раза Виктория была на стороне львовян. Предыдущая встреча в Ужгороде состоялась 13 февраля этого года и завершилась победой львовян со счетом 2:1. Героем поединка стал действующий бразильский легионер «горожан» Альваро, оформивший дубль, а В закарпатской дружине забил Антон Шиндер, которого больше нет в команде.

Фемида

Судьей матча назначен Дмитрий Панчишин из Харькова, для которого это будет всего лишь 5-й матч в Премьер-лиге. Поединок и с Минаем, и со Львовым станет для Панчишина дебютным.

Примерный состав:

«Перевал»: Кучер, Синегуб, Лиховидко, Семенко, Горин, Гончар, Хахлев, Петрусенко, Кулиев, Билоног, Байдал.

«Львов»: Ильющенков, Романчук, Махмутович, Бушко, Якимец, Брикнер, Чиряк, Политыло, Довгий, Грисё, Ныч.

Прогноз противостояния

«Минаж» постарается продолжить беспроигрышную домашнюю серию в чемпионате. Львовяне имеют длинную безголевую серию в УПЛ, но в последних двух официальных матчах горожане сохранили свои ворота в чистоте. Скорее всего, исход поединка будет ничейным.

26 сентября, воскресенье

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl + Enter.

Приложение C: Участники семинара | Смягчение воздействия глобального кризиса цен на продовольствие на питание: резюме семинара

Марселья Гонсалвеш Маргерин, Роберт Ф.Кеннеди Центр правосудия и прав человека

Рубен Граеда, ПАОЗ

Фред Грант, Лэнд О’Лейкс

Каджал Гулати, Международный научно-исследовательский институт продовольственной политики (IFPRI)

Преа Гулати, Университет Джорджа Вашингтона

Антуанетта Хабиншути, Women Thrive Worldwide

Жан-Пьер Халкин, Европейская комиссия

Пейдж Харриган, Спасите детей США

Эллен Харрис, Белтсвиллский исследовательский центр питания человека

Гейл Харрисон, Школа общественного здравоохранения Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе

Syed Saqib Hassan Rizvi, Пакистанский женский форум благосостояния, Равалпинди, Пакистан

Ричард Хацфельд, APCO Worldwide

Шеннон Хейден, CSIS

Хосров Хейдари, Департамент здравоохранения и контроля окружающей среды Южной Каролины

Мэри Хенниган, Католическая служба помощи

Аманда Хинкль, Международный фонд сельскохозяйственного развития

Келли Хортон, Connect Nutrition

Минха Хусайни, Международный фонд Леузера

Тарек Хуссейн, ЮНИСЕФ Египет

Лаура Иияма, журналист

Пол Изенман

Шерил Джексон, USAID

Ивонн Джексон, Администрация по делам старения

Эбони Джеймс, Департамент детского питания USDA/FNS

Луиза Джордан, IOM

Мелисса Джой, USAID

Аллан Джури, WFP

Сэмюэл Кан, консультант по питанию и продуктам питания

Кэролайн Канайза, Медаир, Южный Судан

Доминик Карас, Школа общественного здравоохранения Блумберга имени Джона Хопкинса

Мария Каспарян, Эдезия, ООО

Рэнди Кастнер, Центр политики медицинских технологий

Дженнифер Кейтс, KFF

Бриджит Келли, IOM

Питер Кингори, ВПП, Сомали

Аманда Класинг, Роберт Ф.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.