фк Молде Молде футбольный клуб. fc Molde Molde football club
фк Молде Молде футбольный клуб. fc Molde Molde football club — информация о команде
ИСТОРИЯ КЛУБА | ||||||||||||||||||||||||||||||
| Сезон | Турнир | М | И | В | Н | П | ЗАБ | ПРОП | РАЗН | О | Лучший бомбардир | |
| 2021 | Норвегия. Высшая лига | 1 | 14 | 9 | 3 | 2 | 34 | 13 | 21 | 30 | Охи Омоиджуанфо | 15 |
| 2020 | Норвегия. Высшая лига | 2 | 30 | 20 | 2 | 8 | 77 | 36 | 41 | 62 | Леке Джеймс | 13 |
| 2019 | Норвегия. Высшая лига | 1 | 30 | 21 | 5 | 4 | 72 | 31 | 41 | 68 | Леке Джеймс | 17 |
| 2018 | Норвегия. Высшая лига | 2 | 30 | 18 | 5 | 7 | 63 | 36 | 27 | 59 | Эрлинг Холанд | 12 |
| 2017 | Норвегия. Высшая лига | 2 | 30 | 16 | 6 | 8 | 50 | 35 | 15 | 54 | Бьорн Сигурдарсон | 16 |
| 2016 | Норвегия. Высшая лига | 5 | 30 | 13 | 6 | 11 | 48 | 42 | 6 | 45 | Хармеет Сингх | 5 |
| 2015 | Норвегия. Высшая лига | 6 | 30 | 15 | 7 | 8 | 62 | 31 | 31 | 52 |
|
14 |
| 2014 | Норвегия. Высшая лига | 1 | 30 | 22 | 5 | 3 | 62 | 24 | 38 | 71 | Мохамед Эльюнусси | 13 |
| 2013 | Норвегия. Высшая лига | 6 | 30 | 12 | 8 | 10 | 47 | 38 | 9 | 44 | Даниэль Чима | 9 |
| 2012 | Норвегия. Высшая лига | 1 | 30 | 19 | 5 | 6 | 51 | 31 | 20 | 62 | Дави Анган | 13 |
| 2011 | Норвегия. Высшая лига | 1 | 30 | 17 | 7 | 6 | 54 | 38 | 16 | 58 | Пап Пате Диуф | 12 |
| 2010 | Норвегия. Высшая лига | 11 | 30 | 10 | 10 | 10 | 42 | 45 | -3 | 40 | Байе Джиби Фалль | 16 |
| 2009 | Норвегия. Высшая лига | 2 | 30 | 17 | 5 | 8 | 62 | 35 | 27 | 56 | Мам Диуф | 25 |
| 2008 | Норвегия. Высшая лига | 9 | 26 | 7 | 10 | 39 | 43 | -4 | 31 | |||
| 2007 | Норвегия. Д2 | 1 | 30 | 22 | 3 | 5 | 62 | 28 | 34 | 69 | ||
| 2006 | Норвегия. Высшая лига | 14 | 26 | 7 | 4 | 15 | 29 | 50 | -21 | 25 | ||
| 2005 | Норвегия. Высшая лига | 12 | 26 | 8 | 6 | 12 | 40 | 46 | -6 | 30 | ||
| 2004 | Норвегия. Высшая лига | 11 | 26 | 7 | 10 | 9 | 34 | 37 | -3 | 31 | ||
| 2003 | Норвегия. Высшая лига | 9 | 26 | 9 | 4 | 13 | 32 | 41 | -9 | 31 | ||
| 2002 | Норвегия. Высшая лига | 2 | 26 | 15 | 5 | 6 | 48 | 26 | 22 | 50 | ||
| 2001 | Норвегия. Высшая лига | 5 | 26 | 13 | 5 | 8 | 54 | 41 | 13 | 44 | ||
| 2000 | Норвегия. Высшая лига | 7 | 26 | 11 | 7 | 8 | 46 | 47 | -1 | 40 |
ФК Мольде (Норвегия) 2021-2022 ᐉ Состав, новости, матчи, видео, расписание, турнирная таблица
Футбольный клуб «Мольде» (Норвегия) основан в 1911-м году, выступает на 12-тысячном стадионе «Акер».
«Интер» (Мольде). Фото 1914-го года
Поначалу это было довольно абстрактное объединение, но почти через год команда получила свое первое название – «Интер» (это связывают с тем, что первыми соперниками были команды круизных или торговых суден, заходивших в порт Мольде, а среди футболистов было много датчан, работавших на местном заводе «Гидеон»).
Чуть позже был сыгран первый полноценный матч против настоящей футбольной команды («Кристиансунд»), который завершился со счетом 2:2. Популярность футбола в Норвегии росла быстрыми темпами, и уже в 1915-м году было принято назвать клуб именем города – «Мольде» ФК (или просто MFK). С тех пор название не менялось.
«Мольде» — победитель второго норвежского дивизона. 1973-й год
Восхождение «Мольде» к вершинам норвежского футбола было длительным и тернистым. До середины 1970-х годов «Мольде» прозябал в низших лигах, за исключением, разве что, сезона 1957-1958, когда он ненадолго выбился в элиту. Но это был фальстарт, а настоящий заход в высшую лигу состоялся в 1974-м году. Тогда команда, в которой подобрался замечательный сплав молодости и опыта (хорошее поколение молодых местных талантов удачно дополнили вернувшиеся доигрывать карьеру Хестад, Бракстад и Фульсет) навела приличного шороху, сходу заняв второе место в чемпионате страны. Причем, «Мольде» до последнего тура боролся за чемпионство, но в итоге не смог опередить «Викинг».
С тех пор «Мольде» прочно вошел в элиту норвежского футбола, принявшись регулярно бороться за медали и кубки (конечно, бывали и кратковременные вылеты в низший дивизион, но ненадолго, к тому же сразу после возвращения сине-белые обратно включались в борьбу за наивысшие места).
Домашняя арена «Мольде» — стадион «Акер»
В ХХ веке ближе всего к чемпионству «Мольде» был в 1987-м году, когда в последнем туре его устраивала ничья против прямого конкурента – клуба «Мосс». Но все перечеркнул проигрыш на своем поле (причем, на глазах у рекордно численной публики – 14 615 зрителей собралось на стадионе «Мольде» в ожидании исторического события) со счетом 0:2.
В середине 1990-х клуб оказался в финансовой яме: 500 миллионов долгов и старый «допотопный» стадион. На выручку пришли местные бизнесмены Кьелл Инге Рокк и Бьорн Руне Гьельстен, которые взяли «Мольде» под свою опеку, погасили долги и построили новый современный стадион почти на 12 тысяч мест. Речь идет о расположенном на самом берегу моря чисто футбольном стадионе «Акер», который был сдан в эксплуатацию в 1998-м году.
Первым трофеем в истории «Мольде» стал Кубок Норвегии-1994. Тогда в полуфинале со счетом 4:3 по сумме двух матчей был обыгран мощнейший тогда «Русенборг», а в финале пал «Люн» (3:2). Повторить успех удалось в 2005-м. Но преодолеть гегемонию «Русенборга» и выиграть чемпионство долгое время не «Мольде» не получалось.
Знаковым для всей истории клуба стал приход Уле Гуннара Сульшера – в прошлом блистательного форварда «Манчестер Юнайтед». «Убийца с лицом младенца» за три сезона по главе MFK выиграл два чемпионских титула (2011, 2012) и Кубок-2013. После ухода Сульшера на повышение в «Каридфф» клуб не посыпался, а продолжил побеждать: преемник Скуллеруд выиграл с клубом чемпионство-2014.
В октябре 2015 Сульшер вновь вернулся в клуб, подписав с «Мольде» контракт на 3,5 года.
Уле Гуннар Сульшер пришёл тренировать «Мольде» не случайно: за эту команду он выступал и как футболист, именно отсюда он ушёл в «МЮ».
Уле Гуннар Сульшер — легенда «Мольде»
За полтора года Уле забил 33 гола в ворота соперников MFK – и до сих пор входит в топ-10 бомбардиров команды. Из других голеадоров можно вспомнить Папе Диуфа, воспитанника клуба, а также форварда сборной Норвегии Магне Хосета (лучший голеадор с 84 голами).
Единственная сопоставимая с Сульшером величина в истории «Мольде»: Даниэль Берг Хестад. Хавбек и в 40 лет выступает за «Мольде», провёл в составе клуба больше двадцати (!) лет и с космическим отрывом лидирует в рейтинге гвардейцев MFK.
Футбольный клуб Мольде 2021/2022
Футбольный клуб Мольде (Норвегия), был основан в 1911 году.
Владелец ФК Мольде: Ойстен Неерланн.
Домашний стадион: Стадион Акер
Мольде — матчи
Последний матч футбольная команда Мольде, в рамках чемпионата — Лига конференций УЕФА, сыграла матч с командой Серветт.
Следующий матч команда проведет в рамках чемпионата: Лига конференций УЕФА, 2021-07-29 21:30:00, где Мольде встретится с фк Серветт и отыграют Второй отборочный раунд. Ответные матчи тур чемпионата.
ФК Мольде – показатели команды Футбол, Норвегия
ФК Мольде
Футбол, Норвегия, Команда ФК Мольде. Оригинальное название команды: Molde FK.
ФК Мольде участвует в чемпионате UEFA Europa Conference League, Европа.
В составе команды ФК Мольде 25 игроков. Легионеров в составе: 6 (24%). Средний возраст игроков команды 25,8 лет. Общая стоимость игроков команды составляет 15,151,000 €. Самым высокооплачиваемым игроком команды ФК Мольде является Björn Sigurðarson. Физически показатели, национальность, позиция, рыночная стоимость и список стартовых составов доступны на странице игрока.
Erling Moe — главный тренер команды ФК Мольде. Erling Moe провел 116 матча в рамках тренера команды ФК Мольде. Одержал 71 побед, 21 ничьих и 24 поражений. Набрано очков: 234. Количество набранных за карьеру очков показывает эффективность тренера.
Основным стадионом команды ФК Мольде является Aker Stadion в городе Molde, Норвегия. Вместимость стадиона Aker Stadion составляет 11 800 человек.
Следующий матч команды ФК Мольде состоится 29-го июля 2021 : Серветта – ФК Мольде. На странице матчей Вы можете отслеживать серии, статистику команд, историю движения коэффициентов, а также видео интересных моментов.
Лига Европы УЕФА | Агент: Средние зарплаты в «Мольде» — от 8 до 15 тыс евро, качественный игрок из России на эти деньги в Норвегию не поедет.
Агент Александр Маньяков в разговоре с корреспондентом «Спорта День за Днем» Александром МАКАРОВЫМ дал свою характеристику «Мольде» — сопернику петербургского «Зенита» по раунду плей-офф Лиги Европы.
— По большому счету, «Мольде» — такой же топ-клуб, как и «Русенборг», — отмечает Маньяков. — В Норвегии только две команды такого уровня. По мне, именно будущий соперник «Зенита» — фаворит чемпионата, хотя у «Русенборга» состав поровнее, скамейка лучше.
Средние зарплаты в «Мольде» — от 8 до 15 тыс евро нетто в месяц. 15 тысяч — это уже серьезная зарплата. Основной рынок на продажу — Англия. Прежде всего из-за главного тренера Уле Гунара Сульшера (бывшего игрока «Манчестер Юнайтед. — «Спорт День за Днем») и клубного агента. В селекции ориентируются на лучших игроков на своем рынке. Африканский рынок мониторится, но не так усиленно как другими норвежскими командами.
Главная восходящая звезда — 18-летний нападающий Эрлинг Холанд (№30 на фото . — «Спорт День за Днем»). Его ценник свыше 8 млн евро. Уровень россиян, которые могут играть в «Мольде», должен быть сопоставим с игроком середняка РПЛ. Но на эти деньги, естественно, качественный игрок из России не поедет.
По стилистике я бы сравнил команду с «Ростовым» или «Уфой». Как и все норвежские команды, «Мольде» силен в физическом футболе. Но в добавок к этому для норвежской лиги они качественно контролируют мяч и могут вести игру. Держат высокий темп и прессинг практически на протяжении всей игры. Соперник гораздо более опасный чем «Динамо» Минск. О стандартах говорить не приходится, все норвежские команды в этом компоненте сильны, и именно этот элемент может стать определяющим в противостоянии с «Зенитом».
Напомним, что «Зенит» в третьем квалификационном раунде Лиги Европы прошел минское «Динамо» (0:4, 8:1), а «Мольде» оказался сильнее шотландского «Хайберниана» (0:0, 3:0).
Гранада — Мольде. Прогноз и ставка за 2.05 / 11.03.2021 / Прогнозы на футбол
«Гранада» сыграет на своем поле с «Мольде» в рамках первого матча четвертьфинала Лиги Европы. Игра пройдет 11 марта, начало — в 23:00 мск. «Гранада» — «Мольде»: прогноз, ставка, коэффициенты, статистика.
«Гранада»
«Гранада» в 1/16 финала прошла «Наполи». Победив на своем поле со счетом 2:0, затем андалузцы проиграли на выезде с результатом 1:2.
Команда проводит вполне приличный сезон. Привычной борьбы за выживание нет, что уже отлично, а текущая 10 позиция может расцениваться, как явный прорыв.
В минувшем туре она потерпела поражение. «Гранада» в родных стенах уступила на выезде «Атлетику» с результатом 1:2.
Все прогнозы на Лигу Европы
В целом у клуба наметился определенный состав, поскольку в четырех предыдущих поединках во всех турнирах он потерпел три поражения при одной победе.
«Мольде»
«Мольде» в первом раунде плей-офф неожиданно прошел «Хоффенхайм». После гостевой ничьей 3:3 норвежцы выиграли со счетом 2:0.
Клуб, как чемпион Норвегии, взял свой старт в самом престижном еврокубковом турнире, где был остановлен только из-за правила выездного гола «Ференцварошем» перед самым групповым этапом (3:3 и 0:0).
На групповой стадии Лиги Европы коллектив финишировал на второй строке в своем квартете, набрав десять баллов в шести проведенных встречах.
В чемпионате своей страны, завершившемся в конце декабря, «Мольде» финишировал на второй строке, сильно отстав от лидера. В новом году коллектив еще официальных матчей не проводил.
«Гранада» — «Мольде». Прогноз и ставка
Букмекеры считают фаворитом хозяев поля, коэффициент на победу которых равен 1,44.
Успех гостей оценивается в 7,00, тогда как ничья — в 4,40.
Наши прогноз и ставка — «Гранада» выиграет, и в матче будет забито больше 2,5 голов за 2,05.
ФК «Ростов» нацелился на трансфер нападающего сборной Исландии
Спорт, 23 авг 2017, 19:10СМИ: ФК «Ростов» нацелился на трансфер нападающего сборной Исландии
Читать в полной версииФутбольный клуб «Ростов» планирует приобрести в текущее трансферное окно исландского нападающего норвежского «Мельде» Бьорна Сигурдарсона. Об этом утверждает Интернет-издание Visir.
По информации источника, руководство «Мельде» не устроило первое предложение российского клуба по трансферу 26-летнего исландского форварда, однако переговоры сторон продолжаются.
В текущем сезоне Бьорн Сигурдарсон принял участие в 21 матче «Мельде», в которых отметился 12 голами и тремя результативными мячами. В составе национальной сборной Исландии форвард провел 7 поединков и забил 1 гол.
Авторитетный немецкий портал Transfermarkt оценивает нынешнюю трансферную стоимость исландского нападающего «Мельде» в 900 тыс. евро.
Как сообщал РБК Юг, в текущее трансферное окно ФК «Ростов» пополнился форвардом сборной Узбекистана Элдором Шомуродовым, а также нападающим казанского «Рубина» Владимиром Дядюном.
Академия ФК Ливерпуль впервые посетит Южную Африку
Академия ФК Ливерпуль впервые отправит две команды в Южную Африку для участия в Lucky Star Cup 2020 в конце этого года.
В турнире, который проводится в Кейптауне, принимают участие 2000 футболистов, 130 команд и 45 клубов, и в 2019 году его посетили более 20000 зрителей.
Основанный в 2010 году, когда страна приветствовала чемпионат мира по футболу FIFA, мероприятие, организованное ФК Капштадт, призвано вдохновить молодых футболистов в Южной Африке и по всей Африке за счет увеличения конкуренции и возможностей.
Красные пошлют команды U12 и U14, и у них будет шанс сыграть против некоторых из лучших молодежных команд Африки, включая Al-Ahly, Kaizer Chiefs, Orlando Pirates, Ajax Cape Town, Mamelodi Sundowns и многих других.
Эндрю Паулсленд, руководитель отдела операций LFC Academy, сказал: «Мы абсолютно счастливы, что впервые смогли привезти наших молодых игроков в Южную Африку и поддержать этот турнир.
«Мы знаем, что эта поездка станет не только шансом сыграть против отличных команд со всей Африки, но и прекрасным образовательным и культурным опытом для наших мальчиков».
Официальные лица турнира посетили «Ливерпуль» на этой неделе и смогли рассказать о турнире нескольким игрокам «красных» после победы над «Вест Хэм Юнайтед» на «Энфилде», в том числе нынешнему игроку года CAF в Африке Садио Мане.
Организаторы Lucky Star Cup Лоуренс Де Ваал, Абдулла Соломанс и Зайд Омар с Садио Мане
ПрезидентFC Kapstadt и директор турниров Lucky Star Cup Зайд Омар сказал: «Для ФК Капштадт это гордый момент — впервые в истории принять команды Liverpool FC Academy в Южной Африке.
«Участие команд Академии ФК Ливерпуль соответствует нашему обещанию создать платформу для воплощения мечты в реальность. Таким образом, мероприятие продолжит вдохновлять молодых футболистов из Южной Африки.
«Участие« Ливерпуля »- это исторический момент для южноафриканского футбола. Присутствие команд LFC Academy, безусловно, станет интересным критерием для измерения прогресса нашего юношеского футбола ».
Турнир пройдет с четверга 1 октября по воскресенье 4 октября на стадионе Хартлейвейл и стадионе Кейптауна.
Rapids, FC Cincinnati сообщают о положительных результатах тестов на COVID-19
Матч MLS в Колорадо против Sporting Kansas City был отложен после того, как один из игроков Rapids и три сотрудника дали положительный результат…
Матч MLSColorado против Sporting Kansas City был отложен после того, как у игрока Rapids и у трех сотрудников был положительный результат на коронавирус.
ФК Цинциннати также объявил, что неустановленный игрок дал положительный результат и находится в изоляции. Позже защитник Ник Хагглунд подтвердил в социальных сетях, что заразился COVID-19.
Хагглунд был проверен в четверг на тренировке, и позже той же ночью у него появились симптомы. Он сказал, что тест его жены отрицательный, и они внимательно следят за своей дочерью.
«Я изолирован от них в нашем доме, пока они тоже находятся на карантине. Мы, как семья, были бдительны в ношении масок, мытье рук и ограничении контактов с другими людьми.Пожалуйста, позвольте нашим обстоятельствам стать быстрым напоминанием о том, что этот вирус реален и все еще присутствует », — написал он. «Продолжайте предпринимать шаги, чтобы снизить риск для себя и вашего сообщества. Носить маску. Мойте руки. Не выходи, если тебе это не нужно ».
The Rapids приостановили тренировки, пока игрок и сотрудники с положительным результатом были изолированы. Их не опознали. Команда провела дополнительное тестирование и отслеживание контактов.
Матч между Rapids и Sporting в Коммерс-Сити, штат Колорадо, первоначально запланированный на воскресенье, является первой игрой, отложенной из-за положительных случаев заражения COVID-19 с тех пор, как команды вернулись для игры на своих местных рынках после турнира MLS is Back в Флорида.
Матч еще не перенесен.
МатчЦинциннати против NYCFC, назначенный на субботний вечер на Red Bull Arena, не переносился.
Это первый случай, когда игрок из Цинциннати получил положительный результат. Команда заявила, что у всех остальных игроков и сотрудников отрицательные результаты.
___
Больше футбольных матчей AP: https://apnews.com/Soccer и https://twitter.com/AP_Sports
Авторские права © 2021 Ассошиэйтед Пресс.Все права защищены. Этот материал нельзя публиковать, транслировать, писать или распространять.
Марен Мьельде: Защитник женского «Челси» выбыл из оставшейся части сезона из-за травмы колена | Новости футбола
Защитник «Челси» Марен Мьельде заявила, что пропустит оставшуюся часть сезона из-за травмы колена, полученной в воскресном финале Кубка Континентальной лиги.
31-летний капитан сборной Норвегии был унесен с поля на носилках во второй половине победы «синих» со счетом 6: 0 над «Бристоль Сити» на Викаэдж Роуд.
Мьельде опубликовала сообщение в социальных сетях в понедельник, в котором говорилось: «К сожалению, мой сезон подошел к концу.
» Хорошая новость в том, что моя травма колена не так серьезна, как могло показаться, мне придется пройти операция, но если все пойдет по плану, я вернусь с командой летом ».
Изображение: Мьельде растянулась во время воскресного финала Кубка континентальной лигиБосс «Челси» Эмма Хейс сказала после воскресного матча: «Это горько-сладкий момент для меня, Марен — огромное присутствие в нашей раздевалке, она наседка.Эта победа принадлежит ей ».
Мьельде, перешедшая в «Челси» в 2016 году, в январе подписала продление контракта с чемпионками женской Суперлиги до 2023 года, при этом у клуба есть возможность еще на 12 месяцев.
Кирби продлевает контракт с Челси
Изображение: Фрэн Кирби подписала новый контракт с ЧелсиНападающий «Челси» Фрэн Кирби продлил свой контракт в клубе до 2023 года с возможностью еще на 12 месяцев.
27-летний футболист был неотъемлемым членом команды «Челси» с тех пор, как пришел из Рединга в 2015 году.
Кирби выиграл три чемпионских титула под руководством Хейса, и в этом сезоне игрок сборной Англии забил 15 голов в 21 игре за нынешних лидеров женской Суперлиги.
«Я был частью этого клуба очень долгое время, и это не потребовало много размышлений», — сказал Кирби сайту клуба. «Я знал, где хочу быть, и думаю, вы могли видеть это в моих выступлениях».
Широкая и мощная активность против SARS-подобных вирусов с помощью сконструированного человеческого моноклонального антитела
Нацеливание на сарбековирусы
Продолжая бороться с пандемией COVID-19, мы должны противостоять возможности появления новых патогенных коронавирусов у людей в будущем.Имея это в виду, Rappazzo et al. изолированных антител от выжившего после коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома 2003 года (SARS-CoV) использовали библиотеки дрожжевого дисплея для внесения разнообразия в эти антитела, а затем провели скрининг на связывание с SARS-CoV-2. Одно из потомков с созревшей аффинностью сильно нейтрализовало SARS-CoV-2, SARS-CoV и два связанных с SARS вируса от летучих мышей. Кроме того, это антитело связывается с рецептор-связывающими доменами из панели сарбековирусов, что предполагает более широкую активность, и обеспечивает защиту от SARS-CoV и SARS-CoV-2 на моделях мышей.
Наука , этот выпуск стр. 823
Abstract
Регулярное распространение зоонозных коронавирусов (CoV) на человеческую популяцию подчеркивает необходимость широко активных контрмер. Мы использовали подход направленной эволюции для создания трех антител к коронавирусу 2 (SARS-CoV-2), вызывающих тяжелый острый респираторный синдром, для увеличения глубины нейтрализации и эффективности. Один из вариантов с созревшей аффинностью, ADG-2, проявляет сильную связывающую активность с большой панелью связывающих доменов рецептора сарбековируса и нейтрализует репрезентативные эпидемические сарбековирусы с высокой эффективностью.Структурные и биохимические исследования демонстрируют, что ADG-2 использует другой подход для распознавания высококонсервативного эпитопа, который перекрывает сайт связывания рецептора. На иммунокомпетентных мышиных моделях SARS и COVID-19 профилактическое введение ADG-2 обеспечило полную защиту от респираторной нагрузки, репликации вируса в легких и патологии легких. В целом, ADG-2 представляет собой многообещающий терапевтический кандидат широкого спектра действия против сарбековирусов клады 1.
Пандемия COVID-19, вызванная β-коронавирусом тяжелого острого респираторного синдрома коронавируса 2 (SARS-CoV-2), представляет собой неотложный глобальный кризис в области здравоохранения.Хотя две вакцины и два препарата для лечения моноклональными антителами (mAb) были разрешены для экстренного использования Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США, неизвестно, обеспечат ли эти вакцины и методы лечения широкую защиту от вновь появляющихся штаммов SARS-CoV-2, которые происходят от людей. или резервуары для животных ( 1 ). Более того, повторяющееся зоонозное распространение CoV на человеческую популяцию, наряду с широким разнообразием SARS-подобных CoV, циркулирующих в резервуарах животных ( 2 ), предполагает, что в будущем вероятно появление новых патогенных CoV, и подчеркивает необходимость в широко активные контрмеры.
Как и в других CoV, белок SARS-CoV-2 spike (S) опосредует проникновение вируса и является единственной известной мишенью для нейтрализующих антител (nAbs). Хотя SARS-CoV и SARS-CoV-2 имеют 76% идентичности аминокислот в своих S-белках, на сегодняшний день описано лишь ограниченное количество перекрестно нейтрализующих антител ( 3 — 6 ). Эти редкие широко нейтрализующие антитела (bnAbs) представляют собой привлекательную возможность для создания запасов терапевтических лекарств, чтобы предотвратить или смягчить будущие вспышки COV, связанных с SARS, но их ограниченная эффективность нейтрализации может привести к неоптимальной защитной эффективности или непрактичным режимам дозирования.В этом исследовании мы показываем, что такие bnAb могут быть сконструированы для повышения эффективности нейтрализации при сохранении широты нейтрализации, и мы демонстрируем, что эти bnAb могут обеспечивать широкую защиту in vivo.
Оптимизация аффинности антител против SARS-CoV-2
Мы выделили несколько антител из В-клеток памяти выжившего после SARS 2003 года, которые перекрестно нейтрализуют несколько вирусов, связанных с SARS, с относительно скромной эффективностью ( 3 ). Хотя широта и эффективность часто являются противоположными характеристиками, мы стремились разработать эти bnAb для повышения эффективности нейтрализации против SARS-CoV-2 при сохранении или улучшении широты нейтрализации и эффективности против других вирусов, подобных SARS.Поскольку сродство связывания и эффективность нейтрализации, как правило, хорошо коррелируют ( 7 ), мы использовали технологию отображения поверхности дрожжей для улучшения аффинности связывания трех из bnAb (ADI-55688, ADI-55689 и ADI-56046) для предварительного слияния. стабилизированный белок SARS-CoV-2 S ( 3 , 8 — 10 ).
Дрожжевые дисплейные библиотеки были созданы путем внесения разнообразия в гены вариабельных тяжелых и легких цепей ADI-55688, ADI-55689 и ADI-56046 посредством мутагенеза на основе олигонуклеотидов и трансформации в Saccharomyces cerevisiae путем гомологичной рекомбинации ( 8 ).После четырех раундов отбора с рекомбинантным белком SARS-CoV-2 S1 были отсортированы популяции с улучшенным связыванием, и от 20 до 50 уникальных клонов из каждой линии были проверены на связывание с SARS-CoV-2 S ( 10 ) (рис. 1, A и B, и рис. S1). Связывающие вещества с наивысшей аффинностью из каждой из трех ветвей связывались с S-белком с константами моновалентной равновесной диссоциации (K D s) в пикомолярном диапазоне, что представляет 25-630-кратное улучшение связывания по сравнению с их соответствующими родительскими клонами и превосходя сродство нескольких nAb на клинической стадии (S309, REGN10987, REGN10933 и CB6 / LY-CoV16) (рис.1B и рис. S2A) ( 4 , 11 , 12 ). Чтобы определить, транслируются ли улучшения в аффинности связывания SARS-CoV-2 S в повышенную эффективность нейтрализации, мы выбрали от 9 до 14 потомков с созревшей аффинностью из каждой линии и оценили их на нейтрализующую активность SARS-CoV-2 в вирусе лейкемии мышей (MLV ) псевдовирусный анализ ( 13 ). Все антитела с созревшей аффинностью показали улучшенную нейтрализующую активность по сравнению с их родительскими клонами, а наиболее сильные нейтрализаторы из каждой линии (ADG-1, ADG-2 и ADG-3) показали нейтрализующие полумаксимальные ингибирующие концентрации ( IC 50 s), которые были сопоставимы или ниже, чем наблюдаемые для клинических контрольных nAb SARS-CoV-2 (рис.1Б). Примечательно, однако, что мы не наблюдали корреляции между аффинностью связывания и эффективностью нейтрализации ADG-1, -2 и -3 и антител клинической стадии, что позволяет предположить, что эффективность нейтрализации более тесно связана с тонкой специфичностью эпитопа, чем сродство связывания с префузией. S (рис. S2B).
Рис. 1 Разработка антител против SARS-CoV-2 для увеличения широты и эффективности нейтрализации.( A ) Графики проточной цитометрии из конечного раунда отбора, показывающие связывание родительских антител (светло-синий) и антител библиотеки созревания аффинности (темно-синий) с белком SARS-CoV-2 S1 при 1 нМ.Гейтс указывает популяции дрожжей, отсортированные для секвенирования и характеристики антител. ( B ) Точечные графики аффинностей связывания Fab (слева) и нейтрализации псевдовируса MLV – SARS-CoV-2 (IC 50 s (справа)) родительских антител и потомства с созревшей аффинностью. Для сравнения показаны антитела против SARS-CoV-2 на клинической стадии. ( C ) Тепловая карта, показывающая IC 50 нейтрализации указанных антител против аутентичных SARS-CoV, WIV-1-nLuc, SHC014-nLuc, SARS-CoV-2-nLuc и SARS-CoV-2 на любом из Клетки-мишени HeLa-hACE2 или Vero.Анализы SARS-CoV, WIV-1-nLuc, SHC014-nLuc и SARS-CoV-2 nLuc проводили на клетках-мишенях Vero. Н.Д., не определено; Не применимо, не применимо из-за максимального плато нейтрализации при нейтрализации <50%. ( D ) Аутентичные титрования нейтрализации SARS-CoV-2, выполняемые с использованием клеток-мишеней HeLa-hACE2 (слева) или Vero (справа). Кривые были построены методом нелинейной регрессии. Планки погрешностей представляют стандартное отклонение. Все данные представляют как минимум два независимых эксперимента.
Поскольку инженерия in vitro может привести к полиреактивности с потенциальным риском связывания с мишенью и ускоренного клиренса in vivo ( 14 ), мы оценили ADG-1, ADG-2 и ADG-3 в анализе полиреактивности, который является прогностическим. периода полужизни в сыворотке крови человека ( 15 ).У всех трех антител не было полиреактивности в этом анализе, что указывает на низкий риск плохого фармакокинетического поведения (рис. S3). Три антитела также показали низкую гидрофобность, низкую склонность к самовзаимодействию и термическую стабильность в пределах диапазона, наблюдаемого для клинически одобренных антител (рис. S3). Таким образом, процесс инженерии in vitro, по-видимому, не оказал отрицательного воздействия на биофизические свойства, которые часто связаны с такими характеристиками, как период полужизни в сыворотке, простота производства, способность составлять рецептуры в высоких концентрациях и долговременная стабильность.
Интенсивность нейтрализации и эффективность антител с пониженной селекцией
Чтобы определить, влияет ли процесс аффинной инженерии на широту нейтрализации, мы оценивали ADG-1, ADG-2 и ADG-3, а также их соответствующие родительские антитела для нейтрализации. активность против группы репрезентативных сарбековирусов клады 1 (SARS-CoV, SHC014-nLuc, SARS-CoV-2-nLuc и WIV-1-nLuc). SHC014 и WIV-1 были выбраны потому, что эти два вируса типа SARS летучих мышей легко реплицируются в первичных клетках дыхательных путей человека, что предполагает возможность прямой передачи человеку ( 16 , 17 ).В соответствии с результатами анализа MLV-SARS-CoV-2, ADG-2 продемонстрировал очень сильную нейтрализующую активность против аутентичного SARS-CoV-2-nLuc, с IC 50 , сравнимым или ниже, чем у SARS на клинической стадии. CoV-2 nAbs ( 4 , 11 , 12 , 18 ) (рис. 1C и рис. S4). Кроме того, в отличие от эталонных nAbs, ADG-2 продемонстрировал высокую эффективность нейтрализации против аутентичного SARS-CoV и двух вирусов, связанных с SARS летучих мышей, с IC 50 s между 4 и 8 нг / мл (рис.1С и рис. S4). ADG-3 и клинический nAb S309 также перекрестно нейтрализовали все четыре сарбековируса, но с заметно меньшей эффективностью, чем у ADG-2.
На основе его мощной перекрестной нейтрализации и благоприятных биофизических свойств мы выбрали ADG-2 в качестве ведущего терапевтического кандидата и подтвердили его мощную нейтрализующую активность в альтернативном аутентичном анализе нейтрализации SARS-CoV-2 (IC 50 ~ 1 нг / мл) (Рис. 1, C и D, и рис. S4). Поскольку SARS-CoV-2 D614 → G (D614G) стал доминирующим пандемическим штаммом ( 19 ), мы также провели исследования нейтрализации с MLV-SARS-CoV-2 D614G и подтвердили, что ADG-2 сохраняет мощную нейтрализующую активность против этот штамм (рис.S5).
ADG-2 демонстрирует широкую связывающую активность с RBD сарбековируса 1-го класса
Мы дополнительно оценили широту распознавания сарбековируса ADG-2 путем измерения его очевидной аффинности связывания (K D App ) с панелью из 17 репрезентативных сарбековирусов. рецепторсвязывающие домены (RBD) экспрессируются на поверхности дрожжей ( 20 ). Тринадцать вирусов были отобраны из клады 1, представляющих ближайших известных родственников SARS-CoV-2 (GD-Pangolin и RaTG13) до наиболее расходящихся (SHC014 и Rs4231), а также четыре вируса из отдаленно родственных клад 2 и 3, которые не используют ACE2 в качестве рецептора хозяина ( 21 ) (рис.2А). Рекомбинантный hACE2-Fc и эталонный nAb SARS-CoV-2, описанные выше, были включены в качестве контроля. В соответствии с предыдущими сообщениями ( 10 , 20 ), hACE2 распознавал только RBD 1-го класса и связывал с более высоким сродством с SARS-CoV-2, чем с SARS-CoV (рис. 2B).
Рис. 2 Ширина связывания антител с различными сарбековирусами и циркулирующими вариантами SARS-CoV-2.( A ) Филогенетическое дерево 57 сарбековирусов, построенное с помощью MAFFT (множественное выравнивание с использованием быстрого преобразования Фурье) и анализа максимального правдоподобия аминокислотных последовательностей субдомена 1 RBD, извлеченных из Европейского архива нуклеотидов и базы данных GISAID.Репрезентативные RBD сарбековируса, выбранные для дальнейшего изучения, выделены жирным шрифтом и окрашены в соответствии с их каноническими филогенетическими линиями. ( B ) Тепловая карта связывания антитела и рекомбинантного hACE2 с отображаемыми на дрожжах RBD из 17 репрезентативных сарбековирусов, сгруппированных по филогенетическим линиям. K D Значения приложения были рассчитаны путем подгонки нормализованной нелинейной регрессии. N.B., не связующее в условиях данного анализа. ( C ) Связывание антител с встречающимися в природе вариантами SARS-CoV-2 RBD, отображаемыми на поверхности дрожжей.Последовательности SARS-CoV-2 были извлечены из базы данных GISAID 14 июля 2020 года ( n = 63 551 последовательность). Сигнал связывания антитела был нормализован к экспрессии RBD и рассчитан как процент связывания варианта относительно RBD SARS-CoV-2 WT, оцененный при их соответствующих концентрациях K D App для конструкции WT. Распространенность каждого варианта, рассчитанная по депонированным последовательностям GSAID 9 декабря 2020 г. ( n = 211 539 последовательностей), показана как процент от общего числа проанализированных последовательностей.( D ) Корреляция между количеством устойчивых вариантов SARS-CoV-2 и процентом распознанных RBD сарбековируса клады 1. Все данные представляют два независимых эксперимента.
В соответствии с их широко нейтрализующей активностью, S309, ADG-2 и ADG-3 продемонстрировали широкую реактивность связывания с RBD сарбековируса клады 1, при этом ADG-2 и ADG-3 прочно связывали 12 из 13 вирусов, а S309 связывали все 13 (рис. . 2Б). Примечательно, что ADG-2 связывается с высоким сродством (K D App = 0.От 24 до 1,12 нМ) к каждому RBD сарбековируса клады 1, который обнаруживает обнаруживаемое связывание hACE2, что подтверждает высокую степень консервативности эпитопа ADG-2 среди сарбековирусов, которые могут использовать hACE2 в качестве рецептора. Напротив, ADG-1 связан только с 9 из 13 вирусов, а CB6 / LY-CoV16, LY-CoV555, REGN10987 и REGN10933 связан только с ближайшим эволюционным соседом (ами) SARS-CoV-2, что соответствует их узкому профили нейтрализации (рис. 2В и 1С).
Предыдущие исследования показали, что мутанты RBD, устойчивые к обычно вызываемым nAb SARS-CoV-2, циркулируют в человеческой популяции ( 19 , 22 — 24 ).Поэтому мы стремились оценить широту связывания ADG-2 с циркулирующими в естественных условиях вариантами SARS-CoV-2, которые содержат одиночные аминокислотные замены в RBD. ADG-1, ADG-3 и эталонный nAb SARS-CoV-2 были включены в качестве компараторов. Используя платформу для демонстрации поверхности дрожжей, мы выразили 30 наиболее часто наблюдаемых вариантов RBD SARS-CoV-2, о которых сообщается в базе данных GISAID, а также 6 естественно циркулирующих вариантов SARS-CoV-2, которые, как сообщается, устойчивы к определенным nAb SARS-CoV-2. ( 19 , 22 , 25 ).Один или несколько из 36 вариантов SARS-CoV-2 продемонстрировали потерю связывания с ADG-1, CB6 / LY-CoV16, LY-CoV555, REGN10987 и REGN10933, что определяется потерей> 75% по сравнению с диким типом ( WT) (рис. 2С). Примечательно, что варианты с потерей связывания, идентифицированные для REGN10987 и REGN10933, частично перекрываются с вариантами, идентифицированными в предыдущих исследованиях ускользания нейтрализации in vitro, подтверждая использование дисплея RBD для прогнозирования мутаций ускользания антител ( 26 ). Напротив, ADG-2, ADG-3 и S309 связывались со всеми 36 вариантами на уровнях ≥50% от уровней SARS-CoV-2 дикого типа (рис.2С). Этот результат в сочетании со значительной широтой нейтрализации, наблюдаемой для этих трех mAb (фиг. 1C и 2, B и D), указывает на потенциальную связь между консервацией эпитопа и устойчивостью к ускользанию вируса. Наконец, все антитела сохранили высокоаффинное связывание с вариантом N501Y, который является единственной мутацией RBD, присутствующей в быстро распространяющейся линии B.1.1.7 ( 27 ), что позволяет предположить, что этот недавно появившийся штамм SARS-CoV-2 вероятно, подвержен нейтрализации этими антителами.
ADG-2 связывается с консервативным нейтрализующим эпитопом, перекрывающим сайт связывания hACE2
Чтобы получить более полное представление об антигенной поверхности, распознаваемой ADG-2, мы создали библиотеку RBD отображения мутагенизированной поверхности дрожжей и выполнили раунды отбора для идентификации вариантов RBD которые демонстрируют потерю связывания с ADG-2 по сравнению с конструкцией WT (фиг. 3A и фиг. S6, A и B). Чтобы исключить мутации, которые глобально нарушают конформацию RBD, был проведен последний раунд положительной селекции с использованием смеси рекомбинантного hACE2-Fc и двух RBD-направленных mAb (S309 и CR3022), которые нацелены на неперекрывающиеся эпитопы, отличные от связывания ADG-2. участок ( 4 , 28 ) (фиг.S6B и S7). Отобранные мутанты RBD были индивидуально протестированы на связывание с ADG-2, рекомбинантным hACE2-Fc, CR3022 и S309 для подтверждения сайт-специфических мутаций нокдауна (фиг. S6C). Замены только в четырех положениях RBD — D405E, G502E / R / V, G504A / D / R / S / V и Y505C / N / S — специфически аннулировали связывание ADG-2 (фиг. 3B). Эти четыре остатка являются высококонсервативными среди подрода сарбековируса клады 1 и инвариантными среди вирусов SARS-CoV-1, SARS-CoV-2, SHC014 и WIV1 (рис. 3C), обеспечивая молекулярное объяснение широты проявляемого связывания и нейтрализации. пользователя ADG-2.В соответствии с сохранением этих остатков среди сарбековирусов клады 1, ни одна из замен, влияющих на связывание ADG-2, не присутствовала в полноразмерных последовательностях SARS-CoV-2, депонированных в базе данных GISAID с частотой> 0,001% по состоянию на 9 декабря 2020 г. Кроме того, три из четырех идентифицированных мутаций, которые отменяют связывание ADG-2, лежат в сайте связывания hACE2 ( 29 ), и по крайней мере одна мутация в каждом положении (G502E / R / V, G504V и Y505C / N / S) также аннулировал связывание hACE2 (рис.3B), что, вероятно, объясняется их отсутствием среди циркулирующих изолятов SARS-CoV-2. Эти результаты предполагают, что эволюционная консервация эпитопа ADG-2, вероятно, напрямую связана со связыванием ACE2.
Фиг. 3 ADG-2 связывается с консервативным эпитопом RBD, перекрывая сайт связывания hACE2.( A ) Схема, показывающая создание и отбор мутагенизированной библиотеки SARS-CoV-2 RBD с отображением на поверхности дрожжей для выявления мутаций, которые нарушают связывание ADG-2.( B ) Тепловая карта, показывающая мутации, отменяющие связывание ADG-2 с RBD SARS-CoV-2. S309 и CR3022, которые связывают неперекрывающиеся эпитопы, отличные от сайта связывания ADG-2, включены для контроля мутаций, которые глобально нарушают конформацию RBD. Значения указывают на процент связывания антитела или рекомбинантного hACE2-Fc с мутантным SARS-CoV-2 RBD относительно WT SARS-CoV-2 RBD, оцененных при их соответствующих концентрациях EC 80 (80% эффективных концентраций) для конструкции WT RBD .( C ) Выравнивание белковых последовательностей репрезентативных RBD сарбековируса с последовательностями, окрашенными в соответствии с процентной идентичностью последовательностей и консервацией, показано в виде столбчатой диаграммы. Позиции, очерчивающие рецептор-связывающий мотив, основаны на RBD SARS-CoV-2. Остатки, определенные как важные для связывания ADG-2, на основании данных, показанных в (B), обозначены красным. Однобуквенные сокращения аминокислотных остатков следующие: A, Ala; C, Cys; D, Asp; E, Glu; F, Phe; G, Gly; H, Его; Я, Иль; К, лиз; L, лей; M, Met; N, Asn; P, Pro; Q, Gln; R, Арг; S, Ser; Т, Тр; V, Val; W, Trp; и Y, Tyr.( D ) Крио-ЭМ реконструкция RBD SARS-CoV-2, связанного ADG-2, с нокдаун-мутациями ADG-2 (синий) и выделенным сайтом связывания hACE2 (черный контур). ( E ) Структуры ранее описанных антител (жирный шрифт), представляющие часто наблюдаемые nAb SARS-CoV-2 классов 1–4, наложены на структуру ADG-2 (D) с дополнительными репрезентативными nAb SARS-CoV-2. .
Чтобы подтвердить результаты этого эксперимента, мы выполнили криоэлектронную микроскопию низкого разрешения (крио-ЭМ) комплекса ADG-2, связанного со стабилизированным до слияния SARS-CoV-2 S.Это дало трехмерную реконструкцию с разрешением ~ 6 Å, которая явно имела по крайней мере один ADG-2 Fab, связанный с RBD в восходящей конформации, и позволила нам состыковаться в ранее определенных моделях с высоким разрешением спайка SARS-CoV-2. и гомологичный Fab (фиг. 3D; фиг. S8, A-D; и таблица S1). В соответствии с нашими экспериментами по точному картированию эпитопа (рис. 3B и рис. S7C), эпитоп, распознаваемый ADG-2, перекрывает сайт связывания hACE2, и каждое положение, идентифицированное картированием эпитопа, кластеризуется в щель между тяжелой и легкой цепями ADG- 2 (рис.3D). Этот эпитоп также частично перекрывается с эпитопами, распознаваемыми часто наблюдаемыми nAb SARS-CoV-2 «класса 1» ( 30 ) (рис. 3E). Однако, в отличие от ранее описанных nAb этого класса, ADG-2 связывается с отклоняющимся углом подхода и проявляет широко нейтрализующую активность ( 30 ) (фиг. 3E и 1C и фиг. S8E). Таким образом, ADG-2 связывается с высококонсервативным мотивом под определенным углом доступа.
ADG-2 мощно запускает Fc-опосредованные эффекторные функции in vitro
Поскольку Fc-опосредованные эффекторные функции могут способствовать защите независимо от вирусной нейтрализации, мы оценили способность ADG-2 индуцировать зависимые от антител естественные клетки-киллеры (NK). активация и дегрануляция, антителозависимый клеточный фагоцитоз, опосредованный моноцитами и нейтрофилами, и опосредованное антителами отложение комплемента с использованием анализов эффекторной функции in vitro ( 31 ).Контрольные показатели SARS-CoV-2 nAbs S309 и REGN10987 были включены в качестве компараторов. Примечательно, что хотя ADG-2, S309 и REGN10987 продемонстрировали сравнимый набор фагоцитоза (рис. 4B), эти антитела различались в отношении отложения комплемента и активации NK-клеток (рис. 4, A и C): S309 показал снижение отложения комплемента по сравнению с с ADG-2 и REGN10987, и ADG-2 продемонстрировал более высокую активацию NK-клеток, чем S309 и REGN10987 (фиг. 4). Таким образом, ADG-2 надежно запускает различные Fc-опосредованные эффекторные активности с эффективностью, сравнимой или превосходящей таковые у текущих клинических антител против SARS-CoV-2.
Рис. 4 ADG-2 запускает Fc-опосредованные эффекторные функции.Указанные антитела оценивали на способность индуцировать опосредованные Fc эффекторные функции против мишеней, покрытых RBD, при различных концентрациях. ( A ) Первичные человеческие NK-клетки анализировали на поверхностную экспрессию CD107a, что указывает на дегрануляцию (слева) и продукцию интерферона-γ (IFNγ) (в центре) или фактора некроза опухоли-α (TNFα) (справа) после инкубации. с иммунными комплексами антитело-RBD в течение 5 часов.IgG, иммуноглобулин G. ( B ) Опосредованный антителами фагоцитоз флуоресцентных шариков, покрытых RBD, дифференцированными моноцитами THP-1 (слева) или нейтрофилами HL-60 (справа) измеряли после инкубации с иммунными комплексами в течение 18 часов. Ху., Человек. ( C ) Опосредованное антителами отложение комплемента измеряли путем обнаружения компонента С3 комплемента на флуоресцентных шариках, покрытых RBD, после инкубации комплемента морской свинки с иммунными комплексами в течение 20 мин. MFI, средняя интенсивность флуоресценции.Планки погрешностей представляют стандартное отклонение. Все данные представляют два независимых эксперимента.
ADG-2 широко защищает в мышиных моделях SARS и COVID-19
Наконец, мы проверили способность ADG-2 обеспечивать широкую защиту in vivo на иммунокомпетентных мышиных моделях SARS и COVID-19 с использованием адаптированных для мыши SARS- CoV (MA15) и SARS-CoV-2 (MA10) соответственно ( 32 , 33 ). Мышей Balb / c профилактически лечили либо 200 мкг ADG-2, либо фосфатно-солевым буфером (PBS) посредством внутрибрюшинной инъекции за 12 часов до интраназального заражения дозой MA15 или MA10, равной 10 3 бляшкообразующих единиц (БОЕ).За всеми мышами ежедневно наблюдали на предмет потери веса и изменений дыхательной функции, а группы мышей умерщвляли на 2 или 4 день после инфицирования, чтобы можно было измерить репликацию вируса в легких и проанализировать гистопатологию легких. Мы наблюдали существенную прогрессирующую потерю веса у мышей, подвергнутых ложному лечению, инфицированных обоими вирусами, наряду с увеличением продолжительности паузы (Penh), расчетной меры сопротивления дыхательных путей ( 33 ). Напротив, мыши, которым профилактически вводили ADG-2, демонстрировали минимальную потерю веса, отсутствие изменений Penh и никаких признаков грубой патологии во время сбора урожая (рис.5, А и Б). Кроме того, профилактическое лечение антителами предотвращало репликацию вируса в легких как на 2-й, так и на 4-й день после инфицирования (dpi). Затем мы исследовали способность ADG-2 оказывать противовирусное действие против SARS-CoV-2 MA10 в терапевтических условиях. Мышей обрабатывали 200 мкг ADG-2 или PBS через 12 часов после интраназального заражения дозой МА10 10 3 -БОЕ. У мышей, получавших терапевтический ADG-2, наблюдались промежуточные уровни потери веса, умеренные изменения дыхательной функции и некоторая грубая патология легких — значительно больше, чем у мышей, получавших профилактическое лечение, но значительно меньше, чем у мышей, получавших имитацию (рис.5С). Терапевтическое лечение антителами также привело к значительному снижению вирусной нагрузки легких при 4 dpi, но не при 2 dpi, по сравнению с мышами, получавшими фиктивную терапию. Мы пришли к выводу, что лечение ADG-2 может снизить бремя заболевания у мышей, инфицированных как SARS-CoV MA15, так и SARS-CoV-2 MA10.
Рис. 5 Профилактическое и терапевтическое введение ADG-2 защищает мышей от заболеваний, связанных с SARS-CoV- и SARS-CoV-2.Эффективность профилактического лечения с помощью ADG-2 в моделях заражения ( A ) SARS-CoV – MA15 и ( B ) SARS-CoV-2 – MA10.Разовая доза ADG-2 или имитация лечения вводилась внутрибрюшинно за 12 часов до инфицирования. За массой тела и дыхательной функцией мышей наблюдали в течение 4 дней. Показатели общего легочного кровотечения определяли на 2-й день (МА15) или 4-й день (МА10) после инфицирования, а титры легочного вируса измеряли на 2-й и 4-й дни после инфицирования. ( C ) Терапевтическое лечение с помощью ADG-2 или фиктивное лечение через 12 часов после заражения SARS-CoV-2 – MA10. Массу тела мыши, респираторную функцию, общий балл кровотечения (день 2) и титры вируса в легких (дни 2 и 4) оценивали, как описано выше.Статистические сравнения проводились с использованием тестов Манна-Уитни U или двусторонних тестов t с поправками Холма-Сидака для множественных сравнений (* P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001). Пунктирными линиями обозначен предел обнаружения. Горизонтальные полосы указывают среднее или среднее геометрическое.
Обсуждение
С начала пандемии COVID-19 было выделено множество нейтрализующих антител против SARS-CoV-2, и некоторые из них быстро прошли клинические испытания ( 34 ).Однако эпитопы, распознаваемые большинством этих nAb, сильно варьируют среди других сарбековирусов клады 1, что ограничивает широту их нейтрализации и увеличивает их чувствительность к мутациям ускользания антител ( 22 ). Здесь мы описываем сконструированное антитело, которое нейтрализует SARS-CoV-2 с эффективностью, которая конкурирует с текущими ведущими клиническими nAb SARS-CoV-2, но также в целом нейтрализует другие сарбековирусы клады 1, мощно запускает Fc-опосредованные эффекторные функции и обеспечивает значительную защиту от SARS и COVID-19 в моделях мышей.Таким образом, ADG-2 представляет собой многообещающего кандидата для профилактики и лечения не только COVID-19, но и будущих респираторных заболеваний, вызванных предшествующими заболеваниями, связанными с SARS. Кроме того, наше точное картирование эпитопа и структурные исследования демонстрируют, что ADG-2 использует особый подход для распознавания высококонсервативного эпитопа, который перекрывает сайт связывания рецептора. Этот эпитоп представляет собой ахиллесовую пяту для сарбековирусов клады 1 и, следовательно, является привлекательной мишенью для рациональной разработки вакцин против атипичной пневмонии, которые нацелены на выработку аналогичных широко защищающих антител.
Благодарности: Мы благодарим Т. Боланда за помощь в анализе последовательности SARS-CoV-2; К. Уильямсу за помощь в подготовке фигур; Э. Крауланду, Дж. Нетту и М. Васкесу за полезные комментарии к рукописи; и J. Ludes-Meyers за помощь в трансфекции клеток. Все IgG были секвенированы с помощью Adimab’s Molecular Core и произведены группой High Throughput Expression. Эксперименты по связыванию биослойной интерферометрии были выполнены группой Adimab’s Protein Analytics. Мнения, выводы, интерпретации и рекомендации принадлежат авторам и не обязательно поддерживаются U.С. Армия. Упоминание торговых наименований или коммерческих продуктов не означает одобрения или рекомендации для использования Министерством армии или Министерством обороны. Финансирование: Эта работа частично финансировалась грантами Национальных институтов здравоохранения (NIH) / Национального института аллергии и инфекционных заболеваний (NIAID), присужденных J.S.M. (R01-AI12751), D.N. (R01-AI132317 и R01-AI073148) и R.S.B. (RO1-AI132178 и U54 CA260543). J.E.V. был также поддержан Фондом Билла и Мелинды Гейтс (OPP 1183956).Б.М.Г. и J.M.D. были поддержаны грантом NIH / NIAID 5U19AI142777. Вклад авторов: L.M.W., L.E.G. и R.S.B. задумал и спроектировал исследование. L.M.D. и J.B. провели эксперименты по направленной эволюции. L.V.T., D.H., A.S.H., C.M.O., L.P., L.Y., T.D.S., D.R.B., D.N., J.M.D., J.V. и R.S.B. разработали, спроектировали и выполнили анализы нейтрализации. M.E.B. и J.C.G. разработали и контролировали методы развития и интерферометрии биослоя. C.G.R., C.I.K., M.S. и M.B.B. разработали и выполнили эксперименты по отображению RBD на поверхности дрожжей.Д.В. и J.S.M. разработали и выполнили поверхностный плазмонный резонанс и структурные анализы Biacore T.J.Y. и Б.М.Г. разработали и провели функциональные анализы Fc-эффектора. НОГА. разработали и провели исследования заражения животных. C.G.R., L.V.T., C.I.K., D.W., M.S., D.H., L.M.D., A.S.H., M.B.B., B.M.G., L.E.G. и L.M.W. проанализировали данные. C.G.R., L.V.T., C.I.K., D.W., M.S., D.H., B.M.G., L.E.G. и L.M.W. написал рукопись, и все авторы рецензировали и редактировали статью. Конкурирующие интересы: C.G.R., C.I.K., M.S., L.M.D., M.B.B., M.E.B., J.C.G. и L.M.W. являются сотрудниками Adimab, LLC и могут владеть акциями Adimab, LLC. L.M.W. является сотрудником Adagio Therapeutics, Inc. и владеет акциями Adagio Therapeutics, Inc. D.R.B. входит в научно-консультативный совет Adimab, LLC и Adagio Therapeutics, Inc., а также владеет акциями Adimab, LLC. L.M.W. и J.B. являются авторами заявки на патент, поданной Adagio Therapeutics, Inc., описывающей сконструированные антитела против SARS-CoV-2. Доступность данных и материалов: Последовательности антител депонированы в GenBank под кодами доступа MW417369 к MW417400, MZ439265, MZ439267 и MZ439269.Карта плотности крио-ЭМ ADG-2 была депонирована в банк данных электронной микроскопии под кодом доступа EMD-23160. Все остальные данные доступны в рукописи или дополнительных материалах. IgG доступны от L.M.W. в соответствии с соглашением о передаче материала (MTA) от Adagio Therapeutics, Inc. Вирус для заражения MA15 (SARS-CoV) доступен от BEI Resources как NR-44006; вирус MA10 (SARS-CoV-2) депонирован, но еще не отправлен, пока BEI подтверждает последовательность. MA10 можно получить в Университете Северной Каролины в Чапел-Хилл в рамках стандартного соглашения MTA, поскольку мы ждем, пока BEI будет готов к приему заказов.Клеточные линии и конструкции hACE2 для псевдовирусов и белков доступны от D.N. по соглашению MTA с Исследовательским институтом Скриппса. Мы с благодарностью выражаем признательность авторам из лабораторий-отправителей и лабораторий, представивших материалы, которые сгенерировали и предоставили данные о генетических последовательностях GISAID, на которых основано это исследование (таблица S2). Эта работа находится под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 International (CC BY 4.0), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.Чтобы просмотреть копию этой лицензии, посетите https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/. Эта лицензия не распространяется на рисунки / фотографии / произведения искусства или другой контент, включенный в статью, приписываемый третьей стороне; получить разрешение от правообладателя перед использованием такого материала.Correction (14 июля 2021 г.): Имена последовательностей легких цепей в кодах доступа MZ439265, MZ439267 и MZ439269, к сожалению, не были обновлены для соответствия именам в статье. Последовательности легкой цепи с правильным наименованием были добавлены в заявление о доступности данных и материалов в благодарностях.
MAdCAM-1 Fc Chimera Protein 6056-MC-050 от R&D Systems
- MAdCAM-1 Fc Chimera Protein
- R&D Systems
- Страница поставщика Посмотреть страницу продукта компании
- 6056-MC-050
- 50 мкг
- Биоактивность
- Неконъюгированный
- µ-отфильтрованный
- µ отфильтрованный из раствора 95%, с помощью SDS-PAGE, визуализированного окрашиванием серебром и количественной денситометрией с помощью окрашивания Coomassie® Blue
- Наблюдаемое: 85-100 кДа, условия восстановления
Теоретические: 59.3 кДа (мономер) - Человек
- MAdCAM-1
- Полученный из NS0 рекомбинантный человеческий химерный белок MAdCAM-1 Fc, CF
- Адрес сосудов слизистой оболочки в молекуле клеточной адгезии 1
- MACAM1
использованная литература
Allner C, Melde M, Becker E, Fuchs F, Mühl L, Klenske E, Müller L, Morgenstern N, Fietkau K, Hirschmann S, и др. . Исходные уровни динамической адгезии CD4 + Т-клеток к MAdCAM-1 коррелируют с клиническим ответом на лечение ведолизумабом при язвенном колите: когортное исследование. БМК Гастроэнтерол . 2020 15 апреля; 20 (1): 103.Domenis R, Marino M, Cifù A, Scardino G, Curcio F, Fabris M. Циркулирующие экзосомы экспрессируют интегрин 4-7 и конкурируют с CD4 + Т-клетками за связывание с ведолизумабом. PLoS Один . 2020; 15 (11): e0242342.
Lichnog C, Klabunde S, Becker E, Fuh F, Tripal P, Atreya R, Klenske E, Erickson R, Chiu H, Reed C, et al . Клеточные механизмы лечения этролизумабом при воспалительном заболевании кишечника. Фронт Pharmacol . 2019; 10:39.
Natoni A, Farrell ML, Harris S, Falank C, Kirkham-McCarthy L, Macauley MS, Reagan MR, O’Dwyer M. Ингибирование сиалилтрансферазы приводит к ингибированию взаимодействий опухолевых клеток с E-селектином, VCAM1 и MADCAM1, и улучшает выживаемость в модели мышей с множественной миеломой человека. Гематология . 2020; 105 (2): 457-467
Технические характеристики / особенности
Доступные конъюгаты: Несопряженные1.FC Pirna
Hier erreicht ihr den 1. FCP:
http://www.fcpirna.de
http://www.facebook.com/pages/1-FC-Pirna-eV/245910195473356
1. ФК Пирна (gegründet 02.02.2012)
300. ИНТЕРВЬЮ FACEBOOK-FAN IM GROSSEN BEIM VFL!
300. ИНТЕРВЬЮ FACEBOOK-FAN IM GROSSEN!
EIN «PROMINENTER» GEWINNER VERRÄT VIELE ПОДРОБНЕЕ.
3. Februar 2013
Seit 1980 ist er dem Fußball treu, war letzter Präsident des Kreisverbandes Fußball Sächsische Schweiz und Betreut nun die Internetauftritte des 1.ФК Пирна: Хайко Мельде аус Пирна. Am vergangenen Wochenende klickte der engagierte Fußballer auf die Facebook-Seite des VfL Pirna-Copitz. Melde wurde somit der «300. Facebook-Anhänger» des Vereins. Zu diesem Anlass gewann er ein Интервью, Welches Sie im Beitrag lesen können. Es hat sich ein Gespräch entwickelt, welches viel mehr als ein «Frage-Antwort-Spiel» darstellt. Melde nahm sich reichlich Zeit, um über den VfL, den FCP, die Internetauftritte beider Vereine und alte Erinnerungen zu plaudern.Lesen Sie selbst:
ERSTES FAZIT: «BEITRÄGE AUCH AUF DER KSB-SEITE PLATZIEREN»
Glückwunsch zum 300. Facebook-Fan des VfL Pirna-Copitz, Herr Melde. Wie sind Sie denn auf unsere Seite aufmerksam geworden?
Хайко Мельде: «Vorab, mein Klick, Nr. 300 ‘sollte mich nicht als VfL-Fan outen, sondern vielmehr ein von mir gewolltes — und wer mich kennt — auch ehrliches Interesse bekunden. jedem Facebook-Besuch über Neuigkeiten «von der anderen Elbseite» und ich brauche mich dafür nicht immer direkt auf der VfL-Internetseite einloggen.Как Vorstandsmitglied des 1. FC Pirna schaue ich selbstverständlich auf die Homepage des Kreissportbundes Sächsische Schweiz-Osterzgebirge (KSB). Da machte mich euer Facebookbeitrag etwas stolz, denn bekanntermaßen feiert der 1. FC Pirna demnächst seinen ersten Geburtstag und ist demzufolge auch erst wenige Monate auf der Internetplattform zu finden und bei Facebook mit bereits 342, Auch unsere Домашняя страница vom 1. FC Pirna mit bisher 66.800 Zugriffen steht diesem keinesfalls nach.Das Fazit für mich lautet: Vereinsbeiträge auf der KSB-Seite sind wichtig. Wir sollten uns gleichfalls befleißigen, welche dem KSB anzubieten und wie sie dann verwendet werden, bleibt abzuwarten. » verbessern oder sich wünschen?
Heiko Melde: «Da ich selbst Administrator der Homepage des 1. FC Pirna und des Facebook-Portals des Vereins bin, halte mich keinesfalls an das Sprichwort, Viele Köche verderben den Brei».Daher habe ich mehrere Administratoren auf Facebook und auf der Homepage, jede Mannschaft hat ihren eigenen Zugang und dadurch «leben» meiner Meinung nach die FCP-Seiten etwas mehr auf. Der VfL sollte insbesondere noch mehr Nachwuchsbeiträge mit Euphorie, Spielvorschauen / -auswertungen durch die Mannschaftsverantwortlichen erstellen lassen. Die Verlinkung Aller Beiträge zwischen der Vereinshomepage und Facebook funktioniert meiner Meinung nach perfekt. «
EIGENE ERFAHRUNG:» ICH KENNE DEN VFL ALS ZUVERLÄSSIGEN PARTNER «
,
,
,
,
Verbindung ist gut… Als Schiedsrichter war ich damals immer hern in Copitz und dies meist bei derA- oder B-Jugend sowie bei der ersten Männermannschaft и als letzter Präsident des Kreisverbandes Fußball Sächsische Schweiz war der Vflver stets ei der Vfl. Gern erinnere ich mich auch noch an die Einladungen zum damaligen, OLDI-CUP ‘als Schiedsrichter. Da hätte ich auch gleich eine kleine Bitte: Vielleicht habt ihr noch eine Broschüre, 100 Jahre VfL ‘, denn meine ist leider nicht mehr auffindbar und mir vom Bildmaterial her sehr wichtig.«
GROSSER WUNSCH:« EIN GEMEINSAMES TURNIER IN PIRNA! »
Wir suchen das Archiv nach einer solchen Broschüre mal durch. : «Da gibt es nur den Fußball, dem ich seit 1980 treu bin und dies unter anderem seit 1987 mit Dietmar Wagner gemeinsam. Im Gewinnspiel des Facebook-Interviews war auch angepriesen, dass die, Nr. 300 ‘Фраген Стеллен Канн! Eine hätte ich, es ist vielmehr auch ein Wunsch: Vielleicht gelingt es uns, mal ein gemeinsames Wochenend-Nachwuchsfußballturnier unter Einbeziehung der Stadt usw.auf allen Fußballplätzen в Pirna zu organisieren. «
Herr Melde, wir danken Ihnen herzlich für dieses Gespräch, die interessanten Einblicke und die Zeit, die Sie sich genommen haben. Großes Turnier Organisieren. Das wäre eine großartige Sache für Fußball-Pirna!
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ СЛУЖБА: DIE BEIDEN VEREINE IM INTERNET
DEN 1. FC PIRNA FINDEN SIE IM INTERNET AUF ZWENLITE 9000 Интернет-магазин offizielle Facebook-Auftritt des 1.FC Pirna
GLEICHES GILT AUCH FÜR DEN VFL PIRNA-COPITZ 07:
die offizielle Internetseite des Vereins
der offizielle Facebook-Auftritt des VfL Pirna-Copitz
Dasprechermann des Pirna-Copitz, 07:
Dasprechermann des Copitz.
Mitglied werden | blau-weiss-leipzig
Werde Teil der blau-weißen Fußballfamilie!
Команда Das richtige Finden
Юниорен (männlich)
Du bist fußballbegeistert und möchtest beim FC Blau-Weiß Leipzig aktiv werden? Dann melde Dich bei uns für ein Probetraining an! Als Juniorenspieler musst Du zunächst das richtige Team finden.Домашняя страница Auf unserer нашла самые лучшие команды Du alle. Suche Dir Deinen Jahrgang (Geburtsjahr) heraus und schreibe dem angegebenen Ansprechpartner eine E-Mail. Du bekommst schnellstmöglich eine Antwort. Nach einem beitragsfreien, versicherten Probetraining (максимум 2 Wochen) entscheiden wir gemeinsam, ob eine Anmeldung beim FC Blau-Weiß sinnvoll ist.
Юниорен (Вейблих)
Für fußballbegeisterte Mädchen haben wir eigene Juniorinnenteams. Auch wenn Du grundsätzlich bis zu den U15-Junioren bei den Jungs mitmachen könntest, hast Du hier eine eigene Gruppe nur mit Mädchen.На домашней странице Auf unserer найдены самые разные команды и ответственный партнер. Schreibe eine Mail und Du bekommst eine Antwort mit allen weiteren Informationen. Nach einem beitragsfreien, versicherten Probetraining (максимум 2 Wochen) entscheiden wir gemeinsam, ob eine Anmeldung beim FC Blau-Weiß sinnvoll ist.
Senioren (männlich und weiblich)
Wir verfügen über zwei leistungsorientierte Herrenteams in der Landesliga Sachsen und in der Stadtliga Leipzig. Du bist fußballbegeistert und verfügst über eine solide fußballerische Ausbildung? Домашняя страница Auf unserer нашла лучшего партнера Du die Ansprechpartner.Bitte beachte, dass ein Probetraining zumeist nur in der Vorbereitungszeit möglich ist. Zudem suchen wir immer fußballbegeisterte Frauen ab 16 Jahre! Du hast Freude an regelmäßiger aktiver Bewegung und möchtest neue Kontakte knüpfen? Dann melde Dich bei unserer 1. Frauen an!
Ü35 und Volkssport
Du bist schon etwas reifer, möchtest aber die Töppen noch nicht an den Nagel hängen? Dann melde Dich bei unserer Ü35 an und unterstütze unser Stadtklasse-Team! Du hast nicht so viel Zeit, möchtest aber trotzdem regelmäßig kicken? Dann verstärke unsere Volkssportmannschaft in der Stadtliga Leipzig! Kontakte findest Du in den Menüpunkten Ü35 und Volkssport.
Hinweise bei Vereinswechsel
Du bist bereits bei einem Fußballverein aktiv, möchtest aber bei uns ein Probetraining machen? Dann informiere im Vorfeld unbedingt Deinen aktuellen Verein! Венн Дайне Entscheidung auf den FC Blau-Weiß gefallen ist, musst Du Dich beim alten Verein abmelden.